材料与仪器
标记细胞
乙酸缓冲液
漩涡器
乙酸缓冲液
漩涡器
步骤
1. 收获标记细胞。
2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。
3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。
4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60℃ 加热 5 分钟。
5. 再次用旋涡器振荡混匀，冰浴 15 分钟。
6. 于 4℃ 以 5000 g 离心 10 分钟，此时溶液很清楚地分成 4 相：底部一小块不溶的沉淀，往上是酚相，再上是连接处的白色 SDS 相及上层含 RNA 的水相。
7. 吸出上层水相至新离心管，加 2.5 倍体积含 2% 乙酸钠的乙醇沉淀 RNA，将离心管于 -20℃ 或 -70℃ 放置几小时以充分沉淀 RNA。
8. 离心回收 RNA，抽干，将沉淀溶于少量 TE 缓冲液。
2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。
3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。
4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60℃ 加热 5 分钟。
5. 再次用旋涡器振荡混匀，冰浴 15 分钟。
6. 于 4℃ 以 5000 g 离心 10 分钟，此时溶液很清楚地分成 4 相：底部一小块不溶的沉淀，往上是酚相，再上是连接处的白色 SDS 相及上层含 RNA 的水相。
7. 吸出上层水相至新离心管，加 2.5 倍体积含 2% 乙酸钠的乙醇沉淀 RNA，将离心管于 -20℃ 或 -70℃ 放置几小时以充分沉淀 RNA。
8. 离心回收 RNA，抽干，将沉淀溶于少量 TE 缓冲液。
来源：丁香实验
