大鼠 MSCs 的获得和扩增实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

大鼠MSCs的培养基本上与人MSCs的培养方法相同，只有少许差异。人和大鼠MSCs扩增方案的主要区别是，大鼠MSCs最好在单层细胞40%〜50%汇合时传代，而人的细胞可以在密度达到50%〜60%汇合后传代。这是因为，培养中过度的细胞间接触会使大鼠MSCs的增殖和多向分化潜能显著下降。收集大鼠MSCs时，骨髓细胞应取自新处死动物的长骨。用生长培养基冲洗骨可得到骨髓。来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

收集大鼠骨髓用于MSCs生产

(a)CO2窒息处死动物，切勿使用药物。(b)用酒精擦拭后肢，在不破坏股骨的情况下解剖后肢。将股骨从肢体中分出来。(C)切除股骨上的肌肉和肌腱。用无菌纱布擦拭除去骨上的剩余组织。(d)用酒精擦拭已清理干净的骨，将其放人50 ml塑料管中。(e)用含抗真菌药物的冰浴CCM浸没骨，直到骨髓提取准备完毕。从分离骨到骨髓提取的时间应尽量缩短。(f)装有股骨的离心管移至微生物安全厨中，将骨放人15 cm p

大鼠骨髓原代培养用于MSCs生产

(a)从一根股骨所得的骨髓悬液中取出10μL，与l0μL台盼蓝混合。评估存活率，确保髙于80%。(b)1000 g离心10 min沉淀骨髓。(c)用25 ml预热的含抗真菌药物的CCM重悬骨髓（处理大鼠骨髓细胞使用抗真菌药物，人骨髓细胞不使用）。(d)将25 ml细胞悬液加人到15 cm直径的组织培养板中，37℃，5% CO2环境下至少孵育15 h。(e)从培养箱中取出培养板，吸出培养基。(f)用