纯化 DNA 实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2023-05-27

简介

基因纯化，可以用于（1）对大量提取的质粒DNA进行纯化；（2）常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。

来源：丁香实验

操作方法

从哺乳动物细胞或组织分离DNA

1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次，用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中，将细胞悬液转移到冰浴的离心管中，用 1 ml TBS 冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。于 4℃ 以 1500 g 离心 10 分钟以收获细胞。用 5~10 倍体积经冰预冷的 TBS 重悬细胞并再度离心。用

基因组DNA的快速纯化

第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L Tris，pH 8 1.25 ml 1 mol/L Tris，pH 8100 mmol/L EDTA，pH8 5 ml 0.5 mol/L EDTA，pH 81

纯化质粒（碱裂解法）

1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心机上离心 2 分钟以沉淀大肠杆菌。吸掉培养液。4. 用 100 ul 葡萄糖缓冲液重悬沉淀物。在室温孵育 5 分钟。在这时候充分悬浮大肠杆菌对于获得尽可能大的产量是很重要的。

🔥 磁珠法纯化 DNA

利用独特包埋的磁珠吸附 DNA，随后在特定溶液下洗脱从而达到分离纯化 DNA 的目的。