最新修订时间:
简介
本实验来源于:动物细胞培养——基本技术指南(第五版)
来源:丁香实验
操作方法
1. 约107 个细胞(用细胞刮或胰蛋白酶消化收集)用 D-PBSA (不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的磷酸盐缓冲液,PH 7.2)洗涤 2 次至细胞团块。 2. 提取高分子量基因组 DNA,取一小部分用小型凝胶电泳来检测 DNA 的完整性,如步骤 6 中所述,常规用于细胞系,并可避免使用酚的 DNA 抽提术,见 Stacey 等 [1992] 的描述。 3. 取 1:50 稀释液,用紫外线分
经标记的 M13 噬菌体 DNA 的制备1. 在无菌小管中,将 2 μl 稀释的 M 13 DNA (0.25 ng/μl Boehringer Mannheim,以 1:4 稀释于蒸馏水中)和 11 μl 蒸馏水混匀。 2. 将小管置于沸水浴 2 min。 3. 直接将小管放入冰中 5 min。 4. 在小管中加入 11. 4 μl LS 缓冲液(标记缓冲液,LS 缓冲液,1 mol/L 的 HEPES:DTM :OL 为 10
杂交1. 在聚乙烯三明治盒中,把膜(最多三张膜)放入 200 ml 55°C 预热预杂交液(0.263 mol/L 磷酸氢二钠;7 % (W / V)SDS,1 mmol/L EDTA,1 % (W / V)BSA 片段 V (Roche))中。 2. 55°C下,摇动盒子 4 h。 3. 把膜转移到第二个三明治盒子 150 ml 55°C 预热预杂交液中,同时加人煮沸并冷却的探针。 4. 摇动
相关产品推荐