TUNEL 分析实验

1、取下组织，立即用新制备的 4% 甲醛固定，室温过夜。用多聚甲醛制备 4% 的甲醛溶液，在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛，在通风橱中加热至 50~60 ℃，加几滴 1 mol/L NaOH 使固体全部溶解。多聚甲醛全部溶解后，将溶液放冰上，迅速冷却至室温。加 100 ml pH 7.2 的 2 x PBS，过滤固定液。甲醛储存液应在每次实验前新配。2、通过 50%、70%、80%、95

1. 凋亡诱导之后，200 g 离心 5 分钟收集 1X106 悬浮细胞，用冷的 PBS 洗 2 次，重复离心。 2. 用 2 ml 2% 的甲醛 PBS 溶液固定细胞沉淀，室温下在水平摇床上孵育 30 分钟。 3. 200 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 PBS 洗 1 次。重复离心。 4. 用 500 μl 0.1% Triton X-100，0.1% 柠檬酸钠溶液 4℃ 孵育 2 分钟

1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。 2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上，培养 24~48 小时。凋亡诱导时，细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好，可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血清预处理盖玻片，以使细胞更好地贴壁生长。 3. 诱导凋亡后，用 pH 7.2 的 PBS 轻轻洗细胞 1 次，不要除去垂死细胞，用冰冷的甲醇固定 10 分钟。 4. 室温空气干燥