TUNEL 染色的流式细胞计量术分析

悬浮细胞
PBS 甲醛 柠檬酸钠溶液
流式细胞计量仪

1. 凋亡诱导之后，200 g 离心 5 分钟收集 1X10⁶ 悬浮细胞，用冷的 PBS 洗 2 次，重复离心。

2. 用 2 ml 2% 的甲醛 PBS 溶液固定细胞沉淀，室温下在水平摇床上孵育 30 分钟。

3. 200 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 PBS 洗 1 次。重复离心。

4. 用 500 μl 0.1% Triton X-100，0.1% 柠檬酸钠溶液 4℃ 孵育 2 分钟透化细胞，用 PBS 洗 2 次。

5. 在室温中于 TdT 缓冲液中用 0.3 mmol/L EFFC-12-dUTP、3 mmol/L dATP、25 mmol/L CoCl₂、25 U TdT 37℃ 孵育 1 小时，进行 TUNEL 反应，终体积 50 μl。

6. 37℃ 孵育 1 小时后，加入 2 μl 0.5 mol/L EDTA 终止反应，用 pH 7.2 的 PBS 将细胞洗 2 次。用带有氩激光的流式细胞计量仪分析数据。