贴壁细胞的 TUNEL 染色

细胞
PBS TdT 反应混合液
Parafilm 膜

1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。

2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上，培养 24~48 小时。凋亡诱导时，细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好，可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血清预处理盖玻片，以使细胞更好地贴壁生长。

3. 诱导凋亡后，用 pH 7.2 的 PBS 轻轻洗细胞 1 次，不要除去垂死细胞，用冰冷的甲醇固定 10 分钟。

4. 室温空气干燥玻片 5 分钟，在 pH 7.2 的 PBS 中温育 10 分钟重新水合。

5. 按上述方法进行 TUNEL 反应。将合适的 Parafilm 膜放入温室，膜上加 50 μl TdT 反应混合液，放盖玻片，细胞朝下在反应液上。37℃ 孵育 1 小时。

6. 从室温中取出盖玻片，放回 35 mm 培养皿中。用 PBS 洗细胞 3 次，用 FlooroGuard 固定液固定到载玻片上。