DNA 裂解分析实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

琼脂糖凝胶电泳

1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。 2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。 3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液，轻弹管尖混匀，不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。 4. 加 10 μl 蛋白酶 K，轻弹管尖混匀，50℃ 孵育至少 90 min，也可

个体核的PI荧光

1. 在 96 孔圆底组织培养板中加入 100 μl 悬浮细胞，200 g 离心 5 分钟。 2. 吸出上清，用 250 μl 低渗荧光染料溶液溶解沉淀细胞，用移液管辅助混匀细胞。 3. 样品移至 FACS 微管，旋转搅拌，冰上避光孵育至少 30 分钟，用流式细胞计量仪读取 PI 荧光。测得凋亡细胞核百分率结果。

乙醇固定后PI染色

1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106 细胞，重悬于 300 μl 洗涤缓冲液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇，滴加，并轻微搅拌。旋转搅拌混匀。 2. 14000 g 短时离心沉淀细胞。吸出上清，在 500 μl 洗涤缓冲液中重悬细胞。加 50 μl RNA 酶在室温下孵育 30 分钟酶切 RNA。 3. 加入 500 μl PI 溶液，旋转搅拌，按上述方法进

JAM分析

1. 实验前一天，将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。 2. 收获细胞，在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷标记 2~4 小时。或者，用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷过夜标记较低密度的细胞。 3. 用 HBSS，PBS 或培养基将细胞洗 2 次，在培养基中重悬 0.2X106