coip非特异性结合

针对有非特异性蛋白结合这种情况，可以在无血清培养液中裂解细胞，而对于转移膜上的非特异性吸附，就要注意实验的操作问题，一定要戴手套，用镊子夹取，以及不接触转移膜转移面。

建议可以从以下几个方面进行优化:

1. 调整洗涤条件,增加洗涤次数,也可以试试高盐洗涤液减少非特异性结合。

2. 检查所用抗体,高质量抗体特异性更好,可以减少背景。可以试试不同克隆或品牌的抗体。

3. 增加封闭蛋白量,一般3-5% BSA或脱脂奶粉,封闭1-2小时。这可以有效降低背景。

4. 如果仍存在问题,可以使用Preclearing步骤,先让样品与控制IgG或蛋白A/G球孵育,洗去非特异性结合后再免疫沉淀。

5. 也可以试试一抗结合磁珠后再与细胞裂解液反应,减少非特异性吸附。

6. 对照组设计多个阴性对照,如反向IP,验证结果。

7. 仔细检查各步骤操作,例如裂解度、孵育时间温度等,找到可能的不足之处。

建议:第一在无血清培养液中裂解细胞。第二注意实验的操作问题，一定要戴手套，用镊子夹取，以及不接触转移膜转移面。