材料与仪器
细胞
溶解缓冲液 RNA 酶A T1 混合液 蛋白酶 K DNA 加样缓冲液
Eppendorf 管 移液管 琼脂糖凝胶
溶解缓冲液 RNA 酶A T1 混合液 蛋白酶 K DNA 加样缓冲液
Eppendorf 管 移液管 琼脂糖凝胶
步骤
1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中,4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟,弃上清。
2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。
3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液,轻弹管尖混匀,不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。
4. 加 10 μl 蛋白酶 K,轻弹管尖混匀,50℃ 孵育至少 90 min,也可过夜。
5. 加 5 μl 6X DNA 加样缓冲液,在含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 TAE 的 1%~1.5% 琼脂糖凝胶于孔中加 DNA 样品。
6. 低电压电泳,可以促进 DNA 片段的分离。
7. DNA 序列梯最后有紫外光显示,摄影。凋亡细胞形成明显的 DNA 梯度,而坏死细胞为不清晰的成片条带。活细胞 DNA 在胶顶部,是一个高分子量条带。
2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。
3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液,轻弹管尖混匀,不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。
4. 加 10 μl 蛋白酶 K,轻弹管尖混匀,50℃ 孵育至少 90 min,也可过夜。
5. 加 5 μl 6X DNA 加样缓冲液,在含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 TAE 的 1%~1.5% 琼脂糖凝胶于孔中加 DNA 样品。
6. 低电压电泳,可以促进 DNA 片段的分离。
7. DNA 序列梯最后有紫外光显示,摄影。凋亡细胞形成明显的 DNA 梯度,而坏死细胞为不清晰的成片条带。活细胞 DNA 在胶顶部,是一个高分子量条带。
来源:丁香实验