琼脂糖凝胶电泳-DNA裂解分析实验

细胞
溶解缓冲液 RNA 酶A T1 混合液 蛋白酶 K DNA 加样缓冲液
Eppendorf 管 移液管 琼脂糖凝胶

1. 将 5X10⁵ 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。

2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。

3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液，轻弹管尖混匀，不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。

4. 加 10 μl 蛋白酶 K，轻弹管尖混匀，50℃ 孵育至少 90 min，也可过夜。

5. 加 5 μl 6X DNA 加样缓冲液，在含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 TAE 的 1%~1.5% 琼脂糖凝胶于孔中加 DNA 样品。

6. 低电压电泳，可以促进 DNA 片段的分离。

7. DNA 序列梯最后有紫外光显示，摄影。凋亡细胞形成明显的 DNA 梯度，而坏死细胞为不清晰的成片条带。活细胞 DNA 在胶顶部，是一个高分子量条带。