琼脂糖凝胶电泳知多少

琼脂糖凝胶电泳可以：（1）用于 DNA 切胶回收；（2）用于 DNA 分离；（3）用于佐证 DNA 是否重组、质粒等是否切开以及其他分子生物学研究。

实验原理

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有「分子筛」和「电泳」的双重作用。

琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。

蛋白质和核酸会根据 pH 不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的 pH 在 6～9 之间，离子强度 0.02～0.05 为最适。常用 1% 的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差 100 bp 的 DNA 片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离 DNA 的范围为 0.2～20 kb，利用脉冲电泳，可分离高达 107 bp 的 DNA 片段。

实验步骤

一、试剂配制

5×TBE 缓冲液：450 mmol/L Tris - 硼酸，10 mmol/L EDTA，pH 值 8.0。使用时将上述储存液稀释 10 倍至 0.5×TBE 缓冲液，可同时作为电泳及制胶用的缓冲液。

二、制胶

1. 根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过锥瓶的 50% 容量）。琼脂糖粉末与 0.5×TBE buffer 的比例（w:v）参考表 1，常用琼脂糖浓度为 0.7～1%。

2. 在锥瓶的瓶口上盖上保鲜膜或牛皮纸，并在膜或纸上扎些小孔，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖完全溶解。

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实验注意事项

• 5×TBE 缓冲液放置时间过久会沉淀，因此一次性不要配太多。工作用电泳缓冲液为 0.5×TBE 缓冲液，取 5×TBE 缓冲液贮存液稀释，现配现用。

• 用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。