材料与仪器
细胞
胸腺嘧啶脱氧核苷 HBSS PBS EDTA
新鲜培养基 组织培养板
胸腺嘧啶脱氧核苷 HBSS PBS EDTA
新鲜培养基 组织培养板
步骤
1. 实验前一天，将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。
2. 收获细胞，在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷标记 2~4 小时。或者，用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷过夜标记较低密度的细胞。
3. 用 HBSS，PBS 或培养基将细胞洗 2 次，在培养基中重悬 0.2X106~1X106 细胞/ml 在开始前确定细胞已被标记。
4. 接种细胞于 96 孔平底组织培养板，用推定的凋亡诱导物孵育 5~18 小时。
5. 加 EDTA 至终浓度为 5 mmol/L，用合适的 96 孔板细胞收获仪将细胞收获至玻璃纤维滤器。
6. 在 80℃ 烘箱中 10 分钟或微波 4 分钟干燥滤器。
7. 在塑料袋中密封滤器，加入可生物降解的闪烁液至滤器完全浸润，用 β 计数仪测定放射活性。
8. 按下式计算 DNA 片段含量：
DNA 片段（%）=100%X [1-（试验值/对照值）]
2. 收获细胞，在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷标记 2~4 小时。或者，用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷过夜标记较低密度的细胞。
3. 用 HBSS，PBS 或培养基将细胞洗 2 次，在培养基中重悬 0.2X106~1X106 细胞/ml 在开始前确定细胞已被标记。
4. 接种细胞于 96 孔平底组织培养板，用推定的凋亡诱导物孵育 5~18 小时。
5. 加 EDTA 至终浓度为 5 mmol/L，用合适的 96 孔板细胞收获仪将细胞收获至玻璃纤维滤器。
6. 在 80℃ 烘箱中 10 分钟或微波 4 分钟干燥滤器。
7. 在塑料袋中密封滤器，加入可生物降解的闪烁液至滤器完全浸润，用 β 计数仪测定放射活性。
8. 按下式计算 DNA 片段含量：
DNA 片段（%）=100%X [1-（试验值/对照值）]
来源：丁香实验
