染料排斥法测定细胞生存力实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

生存力分析用于检测潜在的损伤过程，如原代分离、细胞分离或冻融后活细胞的比例。

多数生存力试验都是基于膜的完整性发生了破坏，这可通过染料的摄取来测定，这种染料在正常情况下不能进入细胞（如台盼蓝、藻红或萘黑），或是正常时由活细胞摄取并储留其间，此时被释放出来（如二乙酰荧光素或中性红）。然而，这种效应是瞬时的，并不是总能预示最终的存活。另外，染料排斥总是过高地估计了细胞的生存力，例如保存在液氮中的细胞在融化后有 90% 可能排斥台盼蓝，但仅有 60% 的细胞在 24h后证明能够贴壁。

来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

来源：丁香实验

操作方法

方案22.1 染料排斥法测定细胞生存力实验

材料无菌受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞合适的生长液 20ml 0.25% 胰蛋白酶 5ml D-PBSA10ml 非灭菌血细胞计数板生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）巴斯德吸管显微镜手执计数器操作步骤 1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X106