原理
萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。
将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。
将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。
材料与仪器
胰蛋白酶
巴斯德吸管 显微镜 手执计数器 生存力染料 血细胞计数板
巴斯德吸管 显微镜 手执计数器 生存力染料 血细胞计数板
步骤
材料
无菌
受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞
合适的生长液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml
非灭菌
血细胞计数板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
显微镜
手执计数器
操作步骤
1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X106 个/ml)。
2. 取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片间定在适当位置上（见方案 21.1 和 图 21.1)。
3 . 将一滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀。
4 . 加至血细胞计数板的计数室中（见方案21.1)。
5 . 静置1～2min (但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。
6 . 将计数板置于显微镜下，选择10X 物镜，利用网格线聚焦（图21.1)。
7 . 计数细胞总数以及着色细胞数。
8 .清洗血细胞计数板，放人盒内。
无菌
受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞
合适的生长液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml
非灭菌
血细胞计数板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
显微镜
手执计数器
操作步骤
1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X106 个/ml)。
2. 取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片间定在适当位置上（见方案 21.1 和 图 21.1)。
3 . 将一滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀。
4 . 加至血细胞计数板的计数室中（见方案21.1)。
5 . 静置1～2min (但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。
6 . 将计数板置于显微镜下，选择10X 物镜，利用网格线聚焦（图21.1)。
7 . 计数细胞总数以及着色细胞数。
8 .清洗血细胞计数板，放人盒内。
来源：丁香实验
