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科研学霸天团，48小时有问必答

问GST pull - down assay和免疫共沉淀的区别是什么?

genecreate

GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白，与目的蛋白进行孵育，最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体，在细胞裂解液中与相应的蛋白结果，用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下，最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。区别是pull-down一般是验证体外相互作用；免疫共沉淀一般用于检测细胞水平

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问免疫沉淀实验能用组织样品做吗？

genecreate

可以的免疫沉淀实验当然可以用组织样品做

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问为什么WB的结果是这个样子？是哪一步出了问题

balalaLy

转膜的时候有气泡，以及抗体孵育不均匀。

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问16KD小分子蛋白的WB实验，一直未跑出来，求大神们指点指点。

毛利小五郎的徒弟

胶配的不好，校正一下胶的比例后再来

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问细胞WB抗体怎么选

Piccccbo

一抗选羊抗，兔抗或者是人源性抗体都可以，得结合文献来确定最后用哪种特异性好，另外单克隆优先

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问关于脑蛋白western blot

毛利小五郎的徒弟

蛋白纯化不够，上样感觉上的多了。

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问膜蛋白内参选什么

balalaLy

有一种说法是actin不在膜上面表达，而GAPDH有表达，所以GAPDH会适合一点

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问Western blot的胶

毛利小五郎的徒弟

最好还是不要用过期的胶，效果不好

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问求助关于p-s6蛋白跑WB的问题

bamboopiggy

S6 是mTOR下游的p70S6K的底物，你可以检查一下p70S6k有没有改变，有的时候，pS6对pAKT会有负反馈抑制，所以可能akt的改变不明显，而p-mTOR有不同的磷酸化位点，你查的那个可能正好没有变化，或者是因为mTOR有点大，你wb不好跑

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问请问RAW细胞表达CD86吗

毛利小五郎的徒弟

RAW 264.7是可以表达CD86的

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问想问一下为什么检测未知蛋白的时候要加标签呀？直接用需要检测蛋白的抗体孵不可以嘛？

balalaLy

看是什么标签，像GFP这类荧光标签就是为了方便观察

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问想问问电泳80V，30分钟跑出浓缩胶，分离胶调低电压60V，90分钟跑分离胶，这样蛋白会弥散吗？

balalaLy

蛋白没那么容易弥散，停掉电泳放一个小时也还好，有持续的电流拉着蛋白跑就更不会弥散

3 回答31 围观

问ELISA实验抗体的选择

毛利小五郎的徒弟

单克隆或多克隆抗体都可以用作夹心ELISA系统中的捕获和检测抗体

4 回答154 围观

问ELISA实验检测类型

juyue2010

都可以做的，分泌型的检测上清就行，膜蛋白裂解提总蛋白后检测

4 回答71 围观

问跑wb遇到了一些问题？

juyue2010

查询一下这种细胞常用内参，可能是你稀释比例有问题，或抗体失效

3 回答50 围观

问为什么wb跑出条带所在位置与说明书的分子量大小不符？差别大，该怎么解决

毛利小五郎的徒弟

首先，SDS-PAGE电泳时分子量marker不能作为绝对标准，只是一个参考值。其次，有的蛋白（如组蛋白和一些易形成dimer的蛋白，还有一些比较难变性而又形成紧凑的球形结构的蛋白）在用常规方法电泳时会出现异常行为（表观分子量与实际分子量不符）

3 回答56 围观

问一抗能放在-80度吗？干冰运输

balalaLy

干冰运输，购买的时候商家发货也是干冰运输的。储存还是看说明书的建议。

3 回答53 围观

问wb电泳marker条带异常

申东熙老伯

是配胶的问题，胶的浓度问题，可以改变一下浓度，分离胶适当加大电压。

3 回答121 围观

问Elisa

Piccccbo

没有，抗原和孔板结果本质就是蛋白质和板基质的疏水结合力，是非特异性的，根据蛋白质大小不一样可能有变化，但你的蛋白抗原也不可能变，唯一的话试一试微孔板，板基质状态不一样可能会增加结合力

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问elisa怎么做

juyue2010

先做wb，先根据说明书进行稀释，效果不好的话，进行优化

3 回答150 围观

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