Tar0
用8M尿素提取的蛋白,过镍柱纯化后用200mM NaCl、20mM Tris-HCl、300mM的咪唑洗脱。后续透析的透析液应该用什么?
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透析液的选择应该根据蛋白质的性质和实验要求而定,一般来说,可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。
透析时间一般在2-4小时之间。
更换透析液的时间也应该根据实验要求而定,一般建议在6-8小时和10-14小时(第二天早晨)更换透析液。
sswei
一般来说,可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。
小小翻车鱼
在纯化过程之后,需要使用透析液对目标蛋白进行透析去除多余的盐分和咪唑。透析液的选择应该与目标蛋白的性质以及后续的实验方法相匹配。
根据所述情况,建议使用以下透析液:
1. PBS(磷酸盐缓冲液,pH 7.4):这是最常见的透析液,适用于许多蛋白质纯化后的透析处理。PBS具有较好的生物相容性,可以避免对目标蛋白的干扰。
2. Tris-HCl缓冲液:如果您的目标蛋白对Tris-HCl缓冲液有较好的耐受性,可以考虑使用Tris-HCl缓冲液进行透析。例如,Tris-HCl(50 mM,pH 7.5)可能会是一个合适的选择。
在实际操作中,建议使用透析袋或透析管进行透析。首先将目标蛋白溶液和透析液按一定比例(例如1:10至1:100)混合,然后将混合物放入透析袋或透析管中。将透析袋或透析管浸入一容器中的透析液,使液体充分交换,一般需要数小时至过夜。注意更换容器中的透析液以保持其新鲜。
在透析过程中,请密切关注蛋白质浓度和活性,以确保目标蛋白的稳定性和功能不受影响。
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纯化后的蛋白进行动物实验,需要去除咪唑,请问透析具体选择何种透析液,透析的时长以及透析液的更换时间
粥辰辰辰辰
生物分子必须保存在严格的pH值控制条件下,以稳定其分子极性。典型的透析缓冲液pH范围为6-8。以下为常用的几种可以作为缓冲液的生化溶液:水,PBS,TBS,HEPES,氨基酸缓冲液。