蛋白纯化实验
最新修订时间：
合作专家 | 孙汉寅硕士
生物与医药学 中国科学院大学
审核专家 | 孔旭博士
生物学 厦门大学
简介
在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签，对于大多数蛋白（可溶或包涵体）都可以使用该方法进行初步的纯化。
原理
Ni2+ 能够螯合配体填充并固定在层析介质上，组氨酸（His）带有一个咪唑基团，该基团能够与 Ni2+ 形成配位键并选择性结合，而不带有 His 残基的蛋白不能与 Ni2+ 形成配位键并结合，这样便能有效地将目的蛋白（具有 His-Tag 的蛋白）与非目的蛋白进行有效区分。
随后通过高浓度的咪唑缓冲液与 His-Tag 竞争结合 Ni2+，将目的蛋白洗脱并进行收集，从而得到较为纯净的目的蛋白。
应用
纯化带有 His 标记的目的蛋白。
来源：Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.
操作方法
在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签，对于大多数蛋白（可溶或包涵体）都可以使用该方法进行初步的纯化。
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