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蛋白纯化实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

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合作专家 | 孙汉寅硕士

生物与医药学 中国科学院大学

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审核专家 | 孔旭博士

生物学 厦门大学

简介

在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签,对于大多数蛋白(可溶或包涵体)都可以使用该方法进行初步的纯化。

原理

Ni2+ 能够螯合配体填充并固定在层析介质上,组氨酸(His)带有一个咪唑基团,该基团能够与 Ni2+ 形成配位键并选择性结合,而不带有 His 残基的蛋白不能与 Ni2+ 形成配位键并结合,这样便能有效地将目的蛋白(具有 His-Tag 的蛋白)与非目的蛋白进行有效区分。

随后通过高浓度的咪唑缓冲液与 His-Tag 竞争结合 Ni2+,将目的蛋白洗脱并进行收集,从而得到较为纯净的目的蛋白。

应用

纯化带有 His 标记的目的蛋白。

来源:Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.

操作方法

蛋白过镍柱纯化

在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签,对于大多数蛋白(可溶或包涵体)都可以使用该方法进行初步的纯化。

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