最新修订时间:
合作专家 | 孙汉寅硕士
生物与医药学 中国科学院大学
审核专家 | 孔旭博士
生物学 厦门大学
简介
在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签,对于大多数蛋白(可溶或包涵体)都可以使用该方法进行初步的纯化。
原理
Ni2+ 能够螯合配体填充并固定在层析介质上,组氨酸(His)带有一个咪唑基团,该基团能够与 Ni2+ 形成配位键并选择性结合,而不带有 His 残基的蛋白不能与 Ni2+ 形成配位键并结合,这样便能有效地将目的蛋白(具有 His-Tag 的蛋白)与非目的蛋白进行有效区分。
随后通过高浓度的咪唑缓冲液与 His-Tag 竞争结合 Ni2+,将目的蛋白洗脱并进行收集,从而得到较为纯净的目的蛋白。
应用
纯化带有 His 标记的目的蛋白。
来源:Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.
操作方法
在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签,对于大多数蛋白(可溶或包涵体)都可以使用该方法进行初步的纯化。