天然蛋白_使用 ÄKTA™ start 平台从血清样本中去除白蛋白

血清中包含上千种蛋白质，这些蛋白质在血清中的含量会随不同的生理或病理情况而变化。然而，血清中的某些蛋白质可能是某些疾病的潜在标志物，可用于监测疾病进展或治疗效果。但是血清中白蛋白占血清总蛋白的 55%～65%，如此高的丰度导致对血清中其他蛋白质的研究变得困难。因此，有效分离去除白蛋白是分离鉴定和表征低丰度蛋白的关键，有助于监测相关疾病进程。

血清中的白蛋白的去除可以通过层析来实现。蓝色葡聚糖这种层析介质常被用来选择性地去除血清或培养基中的白蛋白。Blue Sepharose™ 6 FF 是一种与 Cibacron™ Blue 3G 偶联的层析填料。Cibacron™ Blue 3G 是一种多环染料，其可以作为一种芳香胺配体通过静电吸附作用或疏水相互作用来特异性结合白蛋白，从而实现去除白蛋白的目的。

溶液配制

结合缓冲液：20 mM 磷酸钠缓冲液，1L，pH =7.0

洗脱缓冲液：20 mM 磷酸钠缓冲液&2 M NaCl，1L，pH =7.0

1、Unicorn 自动方法编辑

在本实验中将采用 ÄKTA™ start 自动化平台来进行实验，在实验开始先需要先行对相关方法进行编辑，具体参考如下：

2、实验步骤

1）使用 Blue Sepharose™6 FF 层析填料 3mL对Tricorn 10/10（内径：10mm）空柱进行手工装填。将装好的层析柱安装在 ÄKTA™ start 系统上。

2）提前对进入系统的 Buffer 进行超声、过滤脱气处理。将相关管路放置在对应的 Buffer 中。使用结合缓冲液对系统和进样环进行清洗。

3）使用注射器将 1mL 样品（人血清）打入上样环中。运行编辑好的层析程序。

4）在 Frac 30 中提前放入收集管，等待样品收集。

1、实验准备阶段

• 实验开始前需要对系统和管道进行清洗。
• 对 Buffer 进行超声脱气，对系统管路进行除气操作。

2、实验阶段

• 正确设置层析柱报警压力，建议压力低于层析柱耐压 2MPa。
• 确保 Buffer 溶液量足够完成相关实验。
• 确保所有进入系统的 Buffer 溶液温度与设备环境不存在温度差。

3、实验结束

• 实验结束后对层析柱和设备进行清洗。
• 对层析柱执行在位清洗 CIP 和再生。
• 使用 20% 乙醇溶液对层析柱和设备进行保存。