如何将脂类从蛋白中去除

问：抽提细胞总蛋白时，如何将脂类从蛋白中去除？如果目的蛋白可能是脂结合的膜蛋白。

答：作过脂阀研究的人都知道把脂类从细胞蛋白中分离出来非常困难。要用超级离心机，100,000转以上离心几个甚至十几个小时，有点象提细胞膜蛋白的提取。还有一种分级提取的方法，也很烦琐。到目前似乎还没有简单的方法祛除脂类。

答：膜蛋白一般都有疏水性的基团，可以通过它的水溶性来去除脂质物质。为了提高疏水蛋白在水中的水溶性，通常可以添加一些尿素，非离子我、去污剂或两性离子去污剂。这些物质除了增加蛋白的水溶性之外，还可以从蛋白或亚基上去掉脂质。尿素的溶解效应是由于它可以破坏疏水键和离子键，而使蛋白部分去折叠。尿素的浓度取决于对溶解的要求和蛋白变性的影响，一般用4-8mol/L .含尿素的样品，在凝胶中也要加相应浓度的尿素。

有时尿素和tritonx-100或别的非离子去污剂一起使用更能改善结果。非离子去污剂能在不破坏蛋白质的结构，保持生物活性的的情况下改善蛋白的溶解度，但必须选择合适的浓度，过低的浓度不能改善蛋白的溶解性，过高会使蛋白带变宽，影响分辨率和引起纹理现象。甘氨酸是两性离子，可以通过它的偶极矩作用来增加蛋白的可溶性。一般是用1%的浓度。此外有些蛋白提取试剂盒中加的去氧胆酸钠似乎也是去除脂质的。因为我们都知道胆汁酸可以增加脂质的水溶性，从而去除脂质在电泳过程中的干扰。蛋白提取完后把裂解液高速离心下，也有助于去除一些膜物质。上样前离心一下，也是很有好处的。