做蛋白组学的标本有什么要求

1、对于蛋白质溶液样本需提供溶剂的试剂成分；

2、若样品中含有毒性或腐蚀性的物质，必须事先声明；

3、一些病原性的微生物或具有侵染性的病变组织需进行灭活；

4、用银染法进行蛋白胶染色时，应选择与质谱分析兼容的试剂，银染的样本不能进行脱色。

综上可知，制备蛋白质质谱样品没有一个固定或统一的方法，应根据具体的实验目的和质谱分析的要求进行样本制备，在样本制备过程中应遵循准确记录、迅速低温的原则，最大限度的缩短样本采集到实验的时间，避免蛋白质发生降解。

一、动物篇

动物组织的样本蛋白量相对较高，送样量的要求也相对比较宽松，一般提供50~100mg的量即可。此外，组织上有血迹、脂肪、结缔组织的还需要用PBS和组织剪将其清理干净。送样前将样品用液氮速冻5min，放置在-80℃保存，送样时需要置于干冰环境中运输。

动物的悬浮培养细胞也是比较热门的蛋白组学研究对象，如果想做细胞的蛋白组学，起码需要1×107个细胞，离心后收集，置于-80摄氏度环境中。

二、植物篇

植物相较于动物，蛋白占比不高，所以送样在量上面的要求会多一些，推荐送500mg以上的量可以确保实验能够提取到充足的蛋白。如果是种仁、豆类等蛋白含量比较高的，200mg足以完成抽提。

处理样本需要用PBS将样本表面的泥土等杂质冲洗干净，去除掉多余的组织。能够保证样本的形态和纯度，不推荐用锡纸包裹，放在EP管中使其形态完整为好液氮急速冷冻5min后置于-80℃环境中保存，送样时需要添加干冰。

三、微生物篇

微生物比较常规的类型包括细菌和真菌。一般来说1×108个或200mg的样本量可以保证实验顺利进行。

细菌

细菌的收集方法是通过离心弃上清，收集沉淀后用PBS冲洗数次后，用液氮冷却，置于-80℃储藏。

真菌

真菌一般都是以菌株形态存在，不需要溶液介质，所以用PBS洗净后即可放入管中。同样的冷处理处理方式后，干冰寄样。

进行蛋白组学研究时，对组织或细胞样本的量和处理有以下要求：

1. 组织或细胞量：蛋白组学实验需要足够的组织或细胞样本以保证结果的准确性和可重复性。具体所需的样本量取决于实验方法和目标蛋白的丰度。一般来说，至少需要几百毫克到几克的组织或几百万个细胞。在收集样本时，尽量保持组织的完整性以减少对蛋白质组的影响。

2. 送检之前的标本处理：

a. 快速冷冻：新鲜组织采集后，应立即用液氮或干冰迅速冷冻，然后将组织储存在-80°C的低温冰箱中。这有助于减少组织中蛋白质的降解和修饰，保持蛋白质组的稳定性。

b. 避免反复冻融：反复冻融会破坏细胞结构，导致蛋白质的损失和修饰。在实验过程中，尽量减少对样本的冻融次数。

c. 避免使用刺激性试剂：在组织处理和样品制备过程中，避免使用可能改变蛋白质结构和功能的化学试剂，如强酸、强碱和氧化剂等。

d. 取样和处理的一致性：在收集和处理样本时，尽量保持实验条件一致，以减少实验误差。

在准备蛋白组学样品时，应遵循实验方案中的具体要求和操作流程，以确保实验结果的准确性和可重复性。

一、动物篇

动物组织的样本蛋白量相对较高，送样量的要求也相对比较宽松，一般提供50~100mg的量即可。此外，组织上有血迹、脂肪、结缔组织的还需要用PBS和组织剪将其清理干净。送样前将样品用液氮速冻5min，放置在-80℃保存，送样时需要置于干冰环境中运输。

动物的悬浮培养细胞也是比较热门的蛋白组学研究对象，如果想做细胞的蛋白组学，起码需要1×107个细胞，离心后收集，置于-80摄氏度环境中。

二、植物篇

植物相较于动物，蛋白占比不高，所以送样在量上面的要求会多一些，推荐送500mg以上的量可以确保实验能够提取到充足的蛋白。如果是种仁、豆类等蛋白含量比较高的，200mg足以完成抽提。

处理样本需要用PBS将样本表面的泥土等杂质冲洗干净，去除掉多余的组织。能够保证样本的形态和纯度，不推荐用锡纸包裹，放在EP管中使其形态完整为好液氮急速冷冻5min后置于-80℃环境中保存，送样时需要添加干冰。

三、微生物篇

微生物比较常规的类型包括细菌和真菌。一般来说1×108个或200mg的样本量可以保证实验顺利进行。

细菌

细菌的收集方法是通过离心弃上清，收集沉淀后用PBS冲洗数次后，用液氮冷却，置于-80℃储藏。

真菌

真菌一般都是以菌株形态存在，不需要溶液介质，所以用PBS洗净后即可放入管中。同样的冷处理处理方式后，干冰寄样。

四、液体篇

液体样本一般有血清血浆、细胞上清、发酵液、脑脊液等。

整个过程可以分为以下流程：先从组织、体液或细胞中提取蛋白质，拿到蛋白混合溶液（根据你的研究目的，可以对蛋白先做分离，或者不分离），接下来还原烷基化（还原的过程是将蛋白的二硫键打开，然后烷基化可以修饰巯基，防止游离的巯基再生成二硫键）处理，并酶解成肽段。

1，样品的收集与保存

组织样品

1) 对于人体手术切除的组织，有条件的话，最好用PBS（磷酸缓冲盐溶液，作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）取完之后直接去血。如果没有去血，可以-80℃液氮保存，干冰运输。

2）对于小鼠、大鼠、兔子之类的组织样品，建议用灌流的方式来去血，尤其是像肝脏、胃、心脏这类大的组织，可以直接用灌流的方式去血，去得最干净。其次的方案是在后期剪碎的时候去血。

细胞样品

常规实验，建议收到undefined1E6~1E7个细胞以上的样品量（有些实验需要的样品量会少一些，后面会详细讲）。细胞取好后，首先用PBS清洗一下细胞表面，因为大部分培养基里面都含有血清，这部分血清得洗干净了先~

如果是做分泌蛋白研究的话，首先用PBS清洗样品几次，再用条件培养基（不含有血清的培养基）进行培养，根据细胞情况，大概12个小时以后，离心，去掉细胞碎片，取上清，就能提取到分泌蛋白了。

血清样品

1）血浆样品：可以通过医院常用的EDTA抗凝管进行收集，收集到的血浆会呈悬浮状态，离心去掉血细胞。

2）血清样品：现在大部分研究都直接针对血清样品，它的成份更简单，没有凝集素，没有大量的血细胞，针对性会更强。收集血清样品时，直接把血清吸到管子里，室温静置让它凝结，上清黄色部分就是血清样品啦。

2，研磨或超声破碎样品，为了减少人为操作引入的修饰，通常会准备大量的冰，进行冰上的操作。同时还需要加入蛋白酶抑制剂，防止在操作过程中蛋白被样品中自带的蛋白酶降解掉。

3，充分熔接蛋白质，如果蛋白没有充分溶解，能提取到的蛋白就会很少，达不到研究目的。

4，充分解旋蛋白质，通常，蛋白质都是成球状的稳定状态，解旋蛋白质就是将球状蛋白中的二硫键打开，让它形成链状结构，以便进行下一步酶切。

5，酶解蛋白质，一般会用多种酶对蛋白质进行酶解。

6，去除杂质，我们要知道，质谱是一个非常灵敏的仪器，它检测的是多肽的质荷比。所有的盐类，以及所有会进行离子化的杂质，都会干扰到肽段的检测。所以我们会要求进入质谱之前的蛋白样品非常干净。在蛋白水平及肽段水平都会进行去除杂质的步骤。