[求助] 目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG

dxy_tphcsz00

2023-07-24

找到的一个基因它的CDS开头不是ATG，是GTG，我想把这段基因CDS通过双酶切(NdeI Hindiii)连到pet28a载体上，NdeI酶切位点也有ATG ，后面酶切的时候被切走了吧，但是我又看到PET28a表达载体有起始密码子ATG和核糖体结合位点，把插入序列就能进行表达，请问我在设计上游引物时还需要在酶切位点后面加ATG嘛？

5 个回答

dxy_xextz7w2

2023-07-25

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不需要，目的基因插入也是考载体本身启动翻译，跟目的基因本事无关，但是设计引物序列时要考虑插入的目的基因不能有移码突变

土井挞克树

2023-07-25

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需要的，在上游引物应当加ATG

粥辰辰辰辰

2023-07-24

有帮助

这个的话其实是不需要在上游引物上加ATG的

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2023-07-24

有帮助

看你的蛋白质性质，连接到载体上前面最好不要带多余的氨基酸，因为有的蛋白翻译后需要经过修饰才有活性的，如切去ATG编码的第一个甲硫氨酸（MIF家族），若前面带了很多氨基酸，则很难修饰，很可能没有活性。

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2023-07-24

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还是需要在上游引物是加ATG哟