原核表达，加不加IPTG都能表达

dxy_xjnju8o

2023-07-10

我用的质粒是pET28a，目标条带大概在40~55KDa处，加入IPTG的量最初是0.5mM，使用的宿主菌是BL21（DE3）。菌液摇到OD600=0.6-0.8左右时加入IPTG，在37℃时诱导4小时，在低温诱导时（16℃）诱导过夜，但无论何种条件何种培养方式，加IPTG诱导和不加IPTG诱导有目标条带出现在胶图上，Western Blot结果也是如此，且没有任何差异；现在换了宿主菌Rossetta-gami 2(DE3) plysS，SDS-PAGE结果无论诱导与否直接没有结果。理论上来说不加IPTG是不会有结果的，所以想请教各位大佬能不能指条明路。

1 个回答

loveliufudan

2023-07-10

有帮助

在您进行原核表达时，有一些可能的原因导致您无论是否添加IPTG都能观察到目标蛋白条带的出现：

1. 自发性诱导：有些表达载体或宿主菌株在特定条件下可以自发表达目标蛋白，而不需要外源性诱导剂如IPTG。这可能是导致您观察到目标蛋白条带的原因之一。这种自发性表达可能是由于一些突变或其他因素导致的。

2. 泄漏表达：宿主菌中的T7 RNA聚合酶可能存在泄漏表达的现象，即在未添加IPTG的情况下，T7 RNA聚合酶仍能以较低水平转录目标基因。这可能导致您观察到目标蛋白条带的出现。

3. 载体变异：在特定的质粒构建中，存在一些变异或异常情况，使得目标基因在不添加IPTG的情况下也能表达。这可能是由于质粒构建时的误差或突变导致的。

4. 宿主菌株问题：您使用的宿主菌株可能存在一些特殊性质，导致即使不加IPTG也能表达目标蛋白。