LC3总是跑不出来，那个大佬能指点一下，任何步骤都是按要求来的，但就是没目的条带

多查查样本的表达情况和自噬情况。

LC3分子量比较小，只有16KD，在电泳的时候需要使用12%-15%的胶，避免跑过。转膜的时候需要使用0.22um的膜，缩短转膜的时间，40min即可。切莫使用0.45um的膜，否则量相对少的LC3I更不容易显出来。

LC3（Linker of Cytoskeleton and Chromatin 3，细胞骨架与染色质3连接蛋白）是一种在程序性细胞死亡（如细胞凋亡、细胞坏死）中发挥重要作用的蛋白质。在使用Western Blot（蛋白质免疫印迹）进行检测LC3时，若没有出现预期的条带，可能是由以下几个原因导致的：

1. 抗体问题：确保您使用的是正确的抗体，并针对适当的LC3亚型（LC3-I和LC3-II）。抗体浓度和孵育时间也可能影响结果，建议按照供应商提供的推荐条件操作。

2. 样品处理：确保样品制备过程中没有破坏蛋白质。例如，避免过多的超声处理、组织剪切和过度洗涤等操作。

3. 蛋白质提取：确保使用适当的裂解缓冲液和裂解条件，以充分提取细胞中的LC3蛋白。

4. PAGE凝胶浓度：确保使用适当的凝胶浓度以分离LC3蛋白。一般而言，12%或15%的聚丙烯酰胺凝胶适合分离大多数细胞蛋白质。

5. 转膜效率：确保转膜过程中转膜效率足够高。这可以通过延长转膜时间和使用更高质量的转膜缓冲液实现。

6. 一抗和二抗：确保使用正确的一抗和二抗，并遵循适当的稀释比例和孵育时间。

7. 曝光时间：确保在曝光过程中给予足够的曝光时间。较长的曝光时间可能会增强弱信号，但请注意不要过度曝光，以免产生非特异性条带。

8. 胶和膜的显影：检查显影液是否过期或失效。使用新鲜显影液可以改善结果。

如果尝试了以上建议仍然无法检测到LC3蛋白，可能需要重新评估实验设计，或者考虑使用其他方法（如免疫荧光或质谱）进行检测。

我的是抗体的原因，用了同型号但是不同批次的LC3抗体跑出来了，非常之玄学