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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
请问血红蛋白是怎么合成的,它的前体是没有信号肽吗?
Dr_劉医生
血红蛋白是在人体红细胞内,由珠蛋白和血红素合成的。珠蛋白含有四条肽链,血红素是由铁元素和卟啉组成。前体蛋白是存在信号肽的。
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问
询问科研大佬
毛利小五郎的徒弟
那么说明调控这种蛋白的不光是单一通路。
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问
巨噬细胞提取,提出未知细胞
junyong151
看图片应该是巨噬细胞,只不过是细胞产量低而已,应该要对操作过程进行优化。胶原酶消化脂肪组织时,碎组织大小、摇动强度和孵育时间是关键参数,应对其进行优化,以最大限度地提高从脂肪提取巨噬细胞的产量。通过尽可能切碎组织、在消化过程中频繁手动摇动增加接触面积,往往可增加巨噬细胞产量。胶原酶的消化时间应根据每批胶原酶分别进行优化。增加胶原酶缓冲液中的孵育时间,尤其是超过1小时,会显著降低细胞产量并增加细胞死
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问
SDS电泳上蛋白条带可以通过扫描确定大概的表达量吗
juyue2010
细胞的总蛋白量相对固定,选择合适的内参蛋白,与它做对比,使用imageJ灰度值分析,能知道相对表达量。
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问
lasso回归求助
汤姆卜丽波
我知道线性回归是属于机械学习里面的监督学习
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问
HPA应该怎么用?
NatureBios
HPA可以作为参考,因为它的结果对应单独的抗体结果,每个抗体做出来的结果有时会有差异,他有一定的参考价值,其中17年有篇文献使用多家抗体同一个指标做敲除验证,结果只有一家抗体可以完成实验,对于实验结果的准确性,我们或可以使用多家抗体相互验证或设置敲除过表达或刺激验证,增加实验结果的可信度
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问
切胶蛋白回收
bamboopiggy
看你切胶回收的目的是什么了,如果只是拿到变性的蛋白,没问题,但是如果要有活性的,就不能切胶回收
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问
western blot转膜marker模糊
balalaLy
转膜的时候夹得太松了,可以加多一两张滤纸
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wb统计学分析
毛利小五郎的徒弟
普通统计学同样适用于wb实验,组间就t检验就可以做
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Western blot结果求助
balalaLy
封闭不充分或者抗体浓度高,抗体使用次数多,反复冻融等原因都可以导致这种结果
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问
求助:WB条带背景太黑 是什么原因呀
balalaLy
marker转膜成功说明前面的步骤应该都没有问题,唯一不能确定的是你的蛋白有没有提取成功。另外,抗体4度保存一个月肯定不行了吧。你的实验从配胶的试剂到抗体都是有各种不确定性,作为新手菜鸟,这么操作你可能要走完所有的坑你才能做出比较漂亮的结果哦。建议你先借别人的可以用的蛋白和抗体跑一下。
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问
WB的样品蛋白浓度过低怎么办?
bamboopiggy
只能换大孔胶,但是你可以设一个每块胶上都有的标准品,然后读值的时候,都和这个标准品进行比较
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问
基因组电泳图
灵枢天问
这个绝对不正常啊,条带拖尾严重而且界限不清,样品纯度不行
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问
narodrop测蛋白浓度?
bamboopiggy
nanodrop有测蛋白浓度的模块啊,你只要能做一个标准曲线,然后同一波试剂,你就只要测浓度,然后对应标准曲线就可以。
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问
RIP实验跑qpcr 的结果应如何分析?文献都是写%Input ,内参要如何参与计算?
毛利小五郎的徒弟
这个可以先换对数,后取百分比。
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问
请问采用荧光酶标仪检测ROS,DCFH-DA探针的,结果显示的是1.0e5或者2.1e6这样的结果怎么处理?
毛利小五郎的徒弟
你这种情况最好做个对数转换,方便后续处理。
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问
WB跑胶
小小小小小芳
我觉得最主要的原因是蛋白样品在制样时,煮沸时间不够,没有充分被SDS包被,变性不充分。2.样品有降解3.上样量太大,分不开4.有时候,如果蛋白含二硫键的话,还原剂量不足,可能会导致蛋白在跑胶过程中的动态成键,也可能形成拖尾
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问
提取小鼠脾脏组织蛋白。
yanlai000
低效率:液氮研磨,研钵加液氮研成粉末中效率:剪碎后冰上用手动研磨器研磨高效率:全自动研磨器,1.5ml EP管加2mm氧化锆研磨珠2-4颗研磨
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问
蛋白跑出两条带后,统计以哪条为主
bamboopiggy
你别只看条带哪个亮,你要看哪个条带能反应出你实验的差异。就用哪个
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问
请问大家组蛋白western blot是用什么封闭的呢,我用的是索莱宝5%bsa,基本每次都是膜全亮,抗体浓度液试了很多次。
简简单单的8872
检测磷酸化蛋白用5%BSA,检测非磷酸化蛋白一般都用5%脱脂牛奶,索莱宝都有卖
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