毛利小五郎的徒弟
考虑是抗体特异度差,没有特异性检测到目的蛋白导致的
loveliufudan
在 Co-IP 实验中,如果 IP 组(即抗体 IP 组)中检测到的蛋白质表达量超过了 INPUT 组(即非 IP 组),可能是以下几个方面的原因:
实验操作失误:IP 实验过程中可能会出现一些技术操作上的失误,例如洗涤不充分、重悬不均匀等,这些失误可能会导致某些蛋白质在 IP 过程中过度富集或失去,从而影响结果准确性。
抗体特异性问题:IP 实验中,抗体特异性的问题可能会导致误检测到一些不相关的蛋白质,从而影响结果的准确性。特别是当 1P 组中的抗体没有充分的特异性,而且样品中存在与目标蛋白相似的结构、序列或特性的蛋白质,可能会导致特异性误检测到一些不相关的蛋白质。
INPUT 样品质量问题:INPUT 样品是非 IP 组的总蛋白样品,如果样品质量不好,可能会影响实验结果的准确性。例如,输入样品中可能含有较多的杂质蛋白,而且这些杂质蛋白可能会干扰实验的准确性。
蛋白质丰度问题:有些蛋白质在细胞或组织中表达丰度很高,可能会导致在 IP 实验中过度富集,从而在 IP 组中表达量高于 INPUT 组。
赛默飞世尔科技
这个要看是否发生了蛋白与beads发生了非特异结合,建议加入阴性对照组的结果一起来看。如果发生了非特异性结合,要考虑优化封闭条件和洗涤条件。
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