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免疫共沉淀(Co-IP)

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

免疫共沉淀可应用于:(1)测定两种目标蛋白质是否在体内结合;(2)确定一种特定蛋白质的新的作用搭档;(3)分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

来源:丁香实验

操作方法

免疫共沉淀技术

一、试剂准备 1. 预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机。 2. 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS。 3. 加入预冷的RIPA Buffer(1 ml/107个细胞、10 cm培养皿或150 cm2培养瓶,0.5 ml/5x106个细胞、6 cm培养皿、75 cm2培养瓶)。 4. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下,把悬

🔥 细胞免疫共沉淀实验(Co-IP)

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。CO-IP与GST-pulldown方法比较方法优点缺点CO-IP反应蛋白在天然状态下的结合情况,真实可信不能确定蛋白之间的结合是直接还是间接的结合GST-pulldown 能确定蛋白之间是否有直接相互作用 GST分子量较大,可能会影响

Co-IP 背景较深或者条带杂乱的可能原因是什么?如何避免?

1、背景深可能是二抗稀释液不合适导致的,可以用奶粉、BSA 或专门的二抗稀释液,但是需要调节到适当的浓度,例如 2% 奶粉稀释液,1% BSA 稀释液,或是 5% BSA 稀释液,更有甚者可以增加到 10% BSA 稀释液,可多摸索几次,找到最适的浓度,有效降低背景深的问题。2、条带杂乱可能是抗体特异性不强,或是该抗体不适用于 Co-IP 实验,建议在使用抗体时阅读清楚该抗体的适用范围。

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