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免疫共沉淀(Co-IP)

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

免疫共沉淀可应用于:(1)测定两种目标蛋白质是否在体内结合;(2)确定一种特定蛋白质的新的作用搭档;(3)分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

来源:丁香实验

操作方法

免疫共沉淀技术

以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

🔥 细胞免疫共沉淀实验(Co-IP)

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。CO-IP与GST-pulldown方法比较方法优点缺点CO-IP反应蛋白在天然状态下的结合情况,真实可信不能确定蛋白之间的结合是直接还是间接的结合GST-pulldown 能确定蛋白之间是否有直接相互作用 GST分子量较大,可能会影响

Co-IP 背景较深或者条带杂乱的可能原因是什么?如何避免?

1、背景深可能是二抗稀释液不合适导致的,可以用奶粉、BSA 或专门的二抗稀释液,但是需要调节到适当的浓度,例如 2% 奶粉稀释液,1% BSA 稀释液,或是 5% BSA 稀释液,更有甚者可以增加到 10% BSA 稀释液,可多摸索几次,找到最适的浓度,有效降低背景深的问题。2、条带杂乱可能是抗体特异性不强,或是该抗体不适用于 Co-IP 实验,建议在使用抗体时阅读清楚该抗体的适用范围。

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