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我想问一下我做IP-ms后并没有检测到目标抗体蛋白,后面又做了IP-WB验证结果也是符合质谱的结果,这个是否能说明抗体有问题或者

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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实验室小助理夏奇

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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

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有可能是蛋白丰度不够,达不到检测标准,所以抗体验证不到条带

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balalaLy

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目标蛋白没有拉下来或者拉下来的量很少,先增加细胞量试一下。如果还是没有,考虑抗体的问题或者beads的问题。

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loveliufudan

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首先,IP-MS 和 IP-WB 都是常用的蛋白质检测方法,但其原理和检测的对象不同。IP-MS 是一种通过质谱分析的方法,可以检测出蛋白质样本中存在的蛋白质,并鉴定其中的成分。而 IP-WB 是一种通过免疫印迹技术检测特定抗体结合的蛋白质的方法。因此,如果在 IP-MS 中未检测到目标蛋白质,但在 IP-WB 中验证了目标蛋白质的存在,这可能是由于两种方法对样品的要求和检测原理的不同导致的。

其次,关于抗体的问题,有几个方面需要考虑。首先,抗体的质量和特异性对实验结果有重要的影响。如果抗体质量差或者特异性不够好,可能会导致检测结果出现假阳性或假阴性。其次,抗体的适用范围也需要考虑。不同的抗体适用于不同的样品类型和实验条件,如果抗体的适用范围不符合实验要求,也可能导致检测结果不准确。

最后,还需要注意实验操作过程中可能存在的其他问题,比如样品预处理不当、实验条件不稳定等,这些问题也可能会对实验结果产生影响。

因此,在分析实验结果时,需要综合考虑以上多个方面的因素,并结合实验操作的具体细节进行分析和判断。如果实验结果出现了偏差或不符合预期,可以重新检查实验操作过程,并根据需要进行优化或调整。

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赛默飞世尔科技

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如果整个实验的操作步骤和实验设计没有问题的情况下,IP-MS和IP-WB结果都没有靶蛋白,说明目标蛋白表达量很低。但首先需要排除一下,IP过程中是否存在抗原结合水平低,抗原洗脱水平低等因素的影响。

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