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请问在Co-IP结果中,阴参也能IP下来是什么原因?已经增加了洗涤的次数,但是洗涤是颠倒混匀的。

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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实验室小助理夏奇

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3 个回答

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土井挞克树

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考虑是阴参受到了蛋白污染,或者抗体与某些组分非特异性结合产生了ip条带

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loveliufudan

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在 Co-IP 的实验中,如果在样品中存在非特定结合的蛋白质或其他成分,可能会导致阴性对照中出现特异性信号。这种情况可能会出现在样品含量过高或者处理不当的情况下,或者是使用的抗体本身对多种蛋白质具有结合能力。在实验中应该采取措施尽量减少这种非特定结合的情况。

对于你提到的情况,增加洗涤的次数是一种常用的方法,可以有效地减少非特定结合的干扰。颠倒混匀也是常用的洗涤方法,可以有效地保证洗涤的充分性和均匀性。不过,如果仍然出现了阴性对照中的特异性信号,还可以尝试以下几种方法:

改变洗涤缓冲液的 pH 值或盐度。不同的 pH 值和盐度会对蛋白质的结构和电荷产生影响,可能会影响到蛋白质的结合和洗涤性能。

增加洗涤缓冲液中的洗涤剂浓度。洗涤剂可以在一定程度上破坏非特定结合的蛋白质与抗体之间的相互作用,从而减少干扰。

优化抗体和样品的处理条件,例如增加抗体的特异性和亲和力,或者减少样品的含量和处理时间。

增加阴性对照的处理条件和观察结果的标准,以确保结果的准确性。


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赛默飞世尔科技

有帮助

可能是琼脂糖珠的非特意性结合引起的么。可以尝试对琼脂糖珠进行预清除处理,或是改用表面更光滑的磁珠介质。同时,也可以调整洗脱液的成分,比如增加NaCl的浓度或加入一些还原剂以去除非特异性的结合。

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