毛利小五郎的徒弟
大概率是因为环境不同,如ph,温度的差异导致ip抗体变性。
loveliufudan
使用只识别天然蛋白的二抗去除轻重链后洗脱下来的 IP 抗体变性,而目标蛋白不变性的原因可能有以下几个方面:
抗体与目标蛋白的结构稳定性不同:抗体和目标蛋白具有不同的结构稳定性,有些抗体比目标蛋白更容易变性,而有些抗体则比目标蛋白更稳定。
洗脱缓冲液的 pH 值不同:在进行 IP 实验时,使用的洗脱缓冲液可能对抗体和目标蛋白的稳定性产生不同的影响。例如,如果洗脱缓冲液的 pH 值不适宜,可能会导致抗体变性,而目标蛋白则不受影响。
目标蛋白的稳定性:目标蛋白的结构稳定性可能比抗体更高,因此在 IP 实验的过程中,即使使用了含有去除轻重链的二抗,目标蛋白仍然能够保持其天然构象而不变性。
赛默飞世尔科技
酸性洗脱法:0.1 M-0.15 M 甘氨酸 (pH 2.5-3) 是 IP 中最高效的非变性洗脱缓冲液,低 pH 水平可以解离大多数抗体-抗原相互作用。此方法洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析。
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