毛利小五郎的徒弟
igG条带弱可能是由于裂解液中的去垢剂浓度太高或配方过于剧烈、蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定等原因导致。相应的举措有:1、降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类;2、受蛋白的亚细胞定位影响,则新选择裂解液配方来释放目的蛋白;3、选择亲和力更高的抗体以捕获更多的目的蛋白,从而捕获更多的相互作用蛋白;4、选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。
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可能有以下几种原因:
目的蛋白与珠子本身或IgG有非特异性结合,导致背景高。
IP抗体浓度太低,导致目的条带较浅。
IP抗体特异性不好,导致杂带干扰。
IP样品中加入了过多的细胞或组织裂解液,导致信号稀释。
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这是因为背景没有洗干净。可以尝试多洗几次,或是加强洗脱缓冲液的条件。如果是琼脂糖介质,会有非特异性吸附,可以尝试用磁珠来解决。
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