土井挞克树
可以在IP和WB实验中使用相同的抗体,如果目的条带在55kDa左右,可以通过选择与轻链特异性结合的二抗,来消除重链条带对目的蛋白检测的干扰。
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如果使用的免疫沉淀试剂盒无法有效去除特定的抗体,可以考虑以下几种方法:
更换试剂盒:首先可以尝试使用其他品牌的试剂盒,看是否能够更有效地去除目标抗体。不同品牌的试剂盒有不同的性能和特点,选择合适的试剂盒可能会有助于解决问题。
优化洗涤条件:在使用试剂盒进行免疫沉淀的时候,洗涤步骤对于去除非特异性结合的抗体非常重要。可以尝试增加洗涤次数、延长洗涤时间、增加洗涤缓冲液的浓度或者添加洗涤剂等,以增强洗涤的效果,去除目标抗体。
优化抗体浓度和选择特异性更好的抗体:如果使用的抗体浓度过高或者选择的抗体不够特异性,会导致抗体和非特异性的结合,无法被有效去除。可以尝试优化抗体浓度或者选择更特异性更好的抗体。
增加背景抑制剂:在试剂盒的使用过程中,可以添加背景抑制剂,例如牛血清白蛋白、聚乙二醇、Tween-20等,可以帮助去除非特异性结合的抗体。
尝试其他技术:如果使用试剂盒无法去除目标抗体,可以尝试其他技术,例如亲和层析、蛋白质A/G珠等技术,以获得更好的免疫沉淀效果。
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一般解决办法:选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验,然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验,此外二抗选择对于目标种属特异性特别高的二抗。
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