Co-ip ，如何避免下拉抗体的污染

可以考虑将Co-IP抗体共价偶联到磁珠或者Agarose上——这样在洗脱的时候，抗体就不会被洗到CoIP产物中去。

在 Co-IP 实验中，下拉抗体的污染会导致实验结果的偏差，因此需要采取一些措施来避免下拉抗体的污染。以下是几种可能的解决方案：

控制抗体的浓度：下拉抗体的污染可能与抗体浓度过高有关，因此可以尝试降低抗体浓度。

使用预先交联的蛋白 A/G 珠子：蛋白 A/G 珠子可以用于下拉特定的抗体，这种珠子通常是预先交联的，可以避免珠子的表面被抗体污染。因此，使用预先交联的蛋白 A/G 珠子也是一种避免下拉抗体污染的方法。

在洗涤步骤中加入牛血清白蛋白：牛血清白蛋白可以用于防止下拉抗体污染，可以将其添加到洗涤缓冲液中。牛血清白蛋白具有与大多数蛋白质结合的能力，可以将其与可能污染珠子表面的蛋白质结合，防止抗体污染。

对珠子进行交联：在 IP 实验前，可以对珠子进行交联处理，以避免珠子表面被抗体污染。珠子的交联可以使用一些交联剂，如二氧化硅、葡聚糖等。

免疫沉淀复合物是三部分组成的，Protein A(G)凝胶，抗体IgG分子，目标蛋白。SDS-PAGE后，这些成分都会一起转移到膜上。当检测抗体与捕获抗体物种来源相同的时候，二抗会识别捕获抗体的重链轻链分子，导致出现55kDa重链带，20-25kDa轻链带的干扰。避免这些杂信号的影响呢？常见的方法有捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；如果有可能，捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。