【求助】co-IP

做IP，之后Western 分析，看到有两条带，在25和50KD左右，应该是抗体的两条带，但是我的目的蛋白也是52KD的，这该怎么区分呢。

最好是选择与做IP不同来源的抗体来做（比如说IP用鼠的抗体，WB就用兔的抗体），这样就不会检测到抗体的两条带。
如果没有不同来源的抗体的话，就要做IP的时候尽量少放点抗体，跑胶跑得远一点，使得目的蛋白能够被看到，不过由于你的蛋白是在是太接近重链了，要分开难度还是很大，这时候就要很慎重，实验过程要十分肯定检测有这么一条目的条带才行。最好还是能找到不同来源的抗体啦~~

不同种源的抗体WB验证有时在IgG位置也出现条带

最好的办法是用洗脱buffer洗脱 如果是用tag做的IP 则用tag肽洗脱，IgG是能洗掉的

我在做IP的时候也碰到这个问题，因此有点个人经验。有一个很好的方法可以克服这个问题，即用轻链特异性的抗体，这些抗体在Jackson lab里有，我们发现重链没有任何的信号，确实很不错。网址链接：

http://www.jacksonimmuno.com/Catalog/CatPages/rblc.asp

多谢大家！