传代培养喉癌细胞有哪些注意事项？染菌好多次了，求助

喉癌细胞系一般均属贴壁细胞。传代的时候，要注意以下事项：

（1）细胞消化要适度，如何判断适度？当去除胰酶，轻轻拍打培养皿，可以看到细胞呈泥沙状脱离培养皿底；

（2）终止胰酶后，需要离心去上清，去除残余胰酶对细胞的影响；

（3）传代时候，需要先在培养皿中加好适量培养基。将细胞沉淀用 1 ml 培养基吹打成单个细胞，动作要轻柔。一般 1:2-1:3 传代，不可过稀；

（4）预防细胞污染的关键：增强无菌观念，全程无菌操作，随时喷 75% 酒精进行手部消毒。手、移液器等物体切忌从打开的培养皿上方过。若移液器倒吸，立刻扔掉tip头里的细胞，不要存侥幸心理，换一个移液器再操作。污染的移液器需要清理后紫外灭菌再使用。