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免疫共沉淀IP样品,洗不干净怎么办,

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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实验室小助理夏奇

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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以用甘氨酸洗脱:

甘氨酸洗脱
1. 用10 mM的Tris-Cl缓冲液把Beads洗3次,3,000 g速度离心5 min,尽量吸尽洗涤液;
2. 加入洗脱缓冲液(0.2 M Glycine, 0.15% NP40,pH 2.3),一般50 µL的beads 需加入75-100 µL洗脱buffer;
3. 室温震荡洗脱 10 min;
4. 2000 g离心2 min,吸取上清到新的EP管中;
5. 重复step2~4洗脱两次(若洗脱后杂带太多,可适当增加洗脱液体积或者加大原始样品蛋白量);
6. 取十分之一的洗脱样品跑胶银染检查样品洗脱情况;
7. 测定蛋白浓度,取等量蛋白进行trypsin酶解脱盐后,可进行质谱上机。
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loveliufudan

有帮助


如果在免疫共沉淀 (Co-IP) 实验中,洗涤步骤不充分,会导致非特异性结合物的存在,影响实验结果的准确性。如果 IP 样品洗不干净,可以考虑以下几个方面来解决:

增加洗涤步骤:增加洗涤步骤可以有效清除非特异性结合物,提高实验结果的准确性。可以尝试增加洗涤缓冲液的浓度、洗涤次数和洗涤时间等。

调整洗涤缓冲液的成分:洗涤缓冲液的成分可能会影响洗涤效果,可以尝试优化洗涤缓冲液的 pH 值、盐浓度等成分。

调整洗涤方式:可以尝试改变洗涤方式,例如颠倒混匀、振荡或是旋转等方式,以达到更好的洗涤效果。

更换洗涤缓冲液:如果尝试以上方法后洗涤效果仍然不理想,可以考虑更换洗涤缓冲液,或是使用其他清洗方法,例如洗涤盘、离心等方法。

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sswei

有帮助

多次洗涤,并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度。

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赛默飞世尔科技

有帮助

如果您使用的是琼脂糖珠,可以选择使用离心柱来洗涤,或者将琼脂糖珠换成对应的磁珠,这样操作分离更方便,可以相对减少洗涤过程中的样品损失和重复性差的问题。

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