蛋白质实验

蛋白质的等电点是蛋白质的重要特性之一。测定蛋白质的等电点对于了解目的蛋白质的理化性质和设计纯化目的蛋白的策略均有重要帮助。目前，用于测定蛋白质的等电点的方法主要有一种：等电聚焦电泳测定蛋白质等电点。

蛋白质的半衰期即蛋白质降解一半所需的时间，是用以衡量蛋白质稳定性的基本指标，蛋白质半衰期越长表明蛋白质在细胞内越稳定。目前，用于测定蛋白质半衰期的方法主要有两种：脉冲追踪标记法和放线菌酮阻断法。

蛋白质的精确分子量是指分子中含有的全部原子量的总和。目前，用于测定蛋白质精确分子量的方法主要有一种：质谱法测定蛋白质精确分子量。

基于蛋白质光吸收特性测定蛋白质总含量是基于蛋白质不同化学键光吸收特性。目前，基于蛋白质光吸收特性测定蛋白质总含量的方法主要有一种：如紫外光谱吸收法。

基于蛋白质化学呈色反应测定蛋白质总含量是在蛋白质的各种化学呈色反应基础上建立的各种比色法（colori-metry）。目前，基于蛋白质化学呈色反应测定蛋白质总含量的方法主要有三种：如 Lowry 法、二喹啉甲酸法和考马斯亮蓝法。

基于蛋白质元素组成测定蛋白质总含量是基于蛋白质的元素组成特点直接进行分析的方法。目前，基于蛋白质元素组成测定蛋白质总含量的方法主要有一种：如凯氏定氮法。

细胞可溶性蛋白质是指一些能够溶于水或水溶液的细胞内蛋白质分子。目前，用于细胞可溶性蛋白质的含量测定的方法主要有三种：蛋白质的电泳染色分析、蛋白质的免疫印迹法分析和蛋白质分子的流式细胞术分析。

分泌蛋白（secreted protein）是指在细胞内合成后，分泌到细胞外起作用的蛋白质，如消化酶、体液中的部分蛋白成分、抗体和部分激素等。因为分泌蛋白质常存在于成分复杂的体液中，如消化液、血液以及细胞培养的上清中，而且蛋白浓度常相对较低，所以需要使用灵敏度高、特异性好的方法进行分泌蛋白的含量测定。目前，用于细胞可溶性蛋白质的含量测定的方法主要有两种：免疫印迹法和酶联免疫吸附剂测定（enzyme

膜蛋白是存在于细胞质膜中的蛋白质分子，在细胞内分子运输、能量代谢、细胞和组织结构的维护以及细胞信号转导中发挥重要作用。目前，用于细胞膜蛋白提取的方法主要有三种：去垢剂和表面活性剂提取法、生物素化膜蛋白提取法和利用细胞膜糖蛋白的聚糖分离膜蛋白的方法。用于细胞膜中某一膜蛋白含量测定主要有三种：免疫沉淀法、免疫印迹法和在细胞原位采用流式细胞术。

蛋白表达常用检测实验，包括免疫印迹法、免疫沉淀法、点印迹法等。

氨基酸，是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物，化学式是 RCHNH2COOH。羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。氨基酸测序是一个古老的话题，早在 20 世纪 30 年代就已经开始使用各种方法研究氨基酸和多肽。

纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶）; 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是，必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分，因为很多 GPCR—旦被去污剂从质膜中提取出来就会变得不稳定。

NADPH-细胞色素C（P-450）是一种血红素蛋白，它是一个末端氧化酶，由于当它处于还原形式时，与一氧化碳结合形成一种亚铁羰基加成物。在可见光450nm处有最大的吸收峰，故命名为细胞色素P-450，和其他的天然血红素相同，分子中的铁原子是以与原卟啉IX呈符合物的形式存在，肝中含细胞色素P-450酶较丰富。

DNA 酶 I 足迹分析是检测和鉴定转录因子对 DNA 的序列特异性结合能力的一种有效方法（Galas 和 Schmitz,197S)。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍从 PEI 沉淀洗脱σ32 和 RNA 聚合酶需要的盐量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍什么透析条件可使可溶的重折叠σ32 单体得率最高的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

二喹啉甲酸（BCA）检测法是近来新研制的一种改进的 Lowery 测定法，反应简单而且几乎没有干扰物质的影响。来源：《蛋白质技术手册》

由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成「连续系统」和「不连续系统」两种电泳系统。「不连续系统」最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及 pH 不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH 也不相同。在实验中，电泳凝胶分为两层：上层胶为低浓度的大孔胶，称为浓缩胶或成层胶，配制此层胶的缓冲液是 Tr

PPO的纯化可应用于：（1）研究PPO营养机制；（2）PPO生理机制与调节。

PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于：Western杂交时，确认蛋白是否转至PVDF膜上。