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细胞可溶性蛋白质的含量测定实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

细胞可溶性蛋白质是指一些能够溶于水或水溶液的细胞内蛋白质分子。目前,用于细胞可溶性蛋白质的含量测定的方法主要有三种:蛋白质的电泳染色分析、蛋白质的免疫印迹法分析和蛋白质分子的流式细胞术分析。


原理

细胞可溶性蛋白质的含量测定实验的基本原理是根据可溶性蛋白的分类以及待测蛋白质的性质选择不同的方法进行定量,例如,利用基因工程方法获得的细菌可溶性重组蛋白质,常采用蛋白质电泳染色对其表达水平进行初步分析,待蛋白纯化后再直接测定蛋白质的含量;对于真核细胞内的可溶性蛋白质,可通过蛋白质免疫印迹等方法对细胞裂解物或单细胞中的目的蛋白质进行相对定性定量分析。


来源:蛋白质的定性定量分析技术-《医学分子生物学实验技术》药立波第四版

操作方法

电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量

蛋白质的电泳染色分析是用电泳技术将混合液中不同的蛋白质分离开,通过蛋白质染色明确某种蛋白质的相对含量的技术。电泳分离血浆蛋白,染色并计算清蛋白和球蛋白的比例是此法的最早应用。原理电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量的基本原理是电泳技术将混合液中不同的蛋白质分离开,通过蛋白质染色明确某种蛋白质的相对含量得到这种蛋白质在总蛋白中所占比例。蛋白质染色方法包括考马斯亮蓝 R-250 染色法、银染色法(si

免疫印迹法分析测定细胞可溶性蛋白质含量

免疫印迹法(immunoblotting)是对蛋白质混合溶液中目的蛋白进行定性的方法,也是对目的蛋白在不同细胞或者同一种细胞不同条件下的相对含量进行半定量的方法。印迹技术最初用于核酸分子检测,后来人们发现蛋白质在电泳分离之后也可以转移并固定于膜上,因此该方法也用于蛋白质的定性定量分析。相对应于分析 DNA 的 Southern 印迹和分析 RNA 的 Northern 印迹(见第六章),蛋白质印迹

流式细胞术分析测定细胞可溶性蛋白质含量

流式细胞术(flowcytometry assay,flow cytometry,FCM)是一种定量分析技术,是指利用流式细胞仪检测细胞内特异标记的荧光信号,从而测定细胞的多种生化物质(如膜蛋白、抗原、离子或 DNA/RNA 水平等)性质的方法,同时也是一项可以把具有相同荧光信号特征的某些细胞亚群从多细胞群体分离出来的细胞分析技术。

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