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基于蛋白质光吸收特性测定蛋白质总含量

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

基于蛋白质光吸收特性测定蛋白质总含量是基于蛋白质不同化学键光吸收特性。目前,基于蛋白质光吸收特性测定蛋白质总含量的方法主要有一种:如紫外光谱吸收法。


原理

紫外光谱吸收法基本原理是蛋白质在紫外区有两个吸收峰。一个吸收峰在 280nm 处,是由蛋白质中芳香族氨基酸的色氨酸和酪氨酸分子中苯环的共轭双键引起的,其中色氨酸的光吸收最强,酪氨酸次之。大部分蛋白质中的芳香族氨基酸含量差别不大,故可以用溶液在 280nm 处的吸光度推算出蛋白含量。相对纯化的、无核酸污染的蛋白溶液紫外光吸收比值(A280A260)约为 1.8,如此值过低,表明有较多核酸杂质存在。蛋白质在紫外区的另一吸收峰是由肽键引起的,在240nm 以下时光密度急剧增加,215nm 处的吸收率为 280nm 处的数倍。对含量很低的蛋白质溶液可以用 215nm 处的吸光度和 225nm 处的吸光度之差来测定蛋白质含量。


来源:蛋白质的定性定量分析技术-《医学分子生物学实验技术》药立波第四版

操作方法

紫外光谱吸收法测定蛋白质总含量

蛋白质的定量可以用物理测定方法进行。紫外光谱吸收法(ultraviolet spectrometry)可以简单、快速地检测出样品溶液中的蛋白含量。原理紫外光谱吸收法基本原理是蛋白质在紫外区有两个吸收峰。一个吸收峰在 280nm 处,是由蛋白质中芳香族氨基酸的色氨酸和酪氨酸分子中苯环的共轭双键引起的,其中色氨酸的光吸收最强,酪氨酸次之。大部分蛋白质中的芳香族氨基酸含量差别不大,故可以用溶液在 280

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