目标蛋白设三个孔，目标蛋白跑的都不齐，内参是齐的

可能是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶。处理办法：配胶时一定要充分混匀，待其充分凝固后再做后续试验

很正常，实验过程中会产生很多误差，不是所有的空白都一样，你可以试试增加样本量

除非你是同一个样品跑三个复孔，否则不会那么齐的，只要内参齐了，你目标蛋白的趋势是一致的就可以。不能要求完全一样。

电转夹子可能出现了松动，导致电转的时候，胶与膜贴合不紧密。配胶的时候，没有混匀，就灌胶了。

可能是跑胶过程中电泳槽底部有气泡造成的，有气泡导致电流通过不均匀；再有灌胶之间尽量把胶混匀再缓慢灌进板子。降低电压，胶凝固时间1小时以上。