蛋白质实验

在重组蛋白表达纯化的过程中 His-Tag 是最为常见的标签，对于大多数蛋白（可溶或包涵体）都可以使用该方法进行初步的纯化。

蛋白质表达技术是将克隆化基因插入合适载体后导入宿主细胞用于表达蛋白质的方法，按照宿主细胞来划分，蛋白质表达系统可以分为原核表达系统和真核表达系统两大类。原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统等，真核表达系统有酵母菌表达系统、昆虫表达系统、哺乳动物表达系统和植物细胞表达系统。其中芽孢杆菌表达系统作为基因工程表达系统，因具有外源蛋白易分离纯化、表达的外源蛋白不会形成包涵体、无

蛋白质免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体含 pyrin 结构域蛋白 3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family, pyrin domain-containing 3, NLRP3）炎症小体是近年来研究较多的一类多蛋白复合体，通过调控 caspase-1 活化，诱导炎症因子 IL-1β 和 TNF-α 的成熟和分泌，促进炎症和

在肿瘤发生发展过程中，肿瘤组织常处于缺氧、低营养状态，在这种条件下，由于癌细胞分泌的血管生成因子的激活，会促进大量的新血管生成，为肿瘤生长提供所需的氧气和营养物质。

大肠杆菌蛋白表达是一种常用的蛋白质表达体系。大肠杆菌是一种常见的细菌，其在生物工程领域中得到了广泛的应用。通过将目的基因插入到大肠杆菌表达载体中，并利用大肠杆菌代谢途径和生理特征，在大肠杆菌中高效表达目的蛋白。

蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，载体中含有外源的基因片段，通过载体介导，目的是实现外源基因在宿主中的表达，本文以用于小鼠及兔源 IgG 的通用型二抗 PA/G-HRP 融合蛋白的真核表达为例进行表述。

蛋白质是生命体中最重要的基本组成部分之一，它们在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。因此，研究蛋白质的结构和功能对于理解生命体的基本机制和开发新药物具有重要意义，而蛋白质提取是研究蛋白质的关键步骤之一。

PLA 技术全称为 Proximity Ligation Assay，是看得见的蛋白互作新技术，即便是微量样本、微弱或者瞬时的互作以及低丰度的表达，也能在内源水平可视化目的蛋白的互作、定位和定量。并且该技术可将蛋白信号放大千倍，灵敏度高、特异性好。不仅如此，该技术操作简单，用时短，仅需一天即可得到结果。

作为高度分化的多核巨细胞，破骨细胞主要来源于单核/巨噬细胞造血干细胞系，是一种具有骨吸收功能的细胞，目前研究破骨细胞分化的经典细胞系包括小鼠 RAW264.7 单核巨噬细胞系与小鼠原代 BMMs 细胞系。其中 RAW264.7 细胞是 Abelson 鼠白血病病毒诱导 BALB/c 小鼠肿瘤生成后，收集小鼠腹水中单核样巨噬细胞得到的细胞株，被广泛应用于细胞生物学和免疫学研究中。RAW264.7 细

将目的基因转录调控原件构建到萤火虫荧光素酶报告基因质粒上，与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞，裂解细胞后分别加入荧光素酶底物，会发出生物荧光，从而被荧光测定仪读取。计算萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶的相对比值，可以判断对目的基因转录调控原件的影响。

酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）广泛存在于各种细胞中，在部分癌细胞中酸性磷酸酶往往会异常表达。以对硝基酚磷酸钠作为酸性磷酸酶反应底物，在碱性条件下能够水解生成黄色的对硝基酚，通过比色测定即可对 ACP 进行定量分析。

寡聚化指单体化合物之间形成二、三、四聚体或长链分子（低聚物）。在生物背景下，寡聚化通常是指生物大分子（如蛋白质）通过非共价相互作用形成大分子复合物的过程。在生理或病理状态下，生物体内都会有寡聚化的现象。

来源：《蛋白质与蛋白质组学实验指南》

代谢标记技术用于研究蛋白质的生物合成、加工、细胞内运输、分泌、降解和物理化学特性。

免疫共沉淀可应用于：（1）测定两种目标蛋白质是否在体内结合；（2）确定一种特定蛋白质的新的作用搭档；（3）分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

酵母双杂交系统(yeast two-hybrid)以酵母遗传分析为基础，研究反式作用因子之间相互作用对真核基因转录调控影响的实验系统。其最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库，以获得新的蛋白质之间的相互作用，并分析研究新的基因。本技术不仅可用于鉴定新的蛋白质相互作用，证实可疑的相互作用，确定相互作用的结构域，而且可直接获得编码相互作用的蛋白的基因。

蛋白质的相对分子量即依据蛋白质的某些理化性质，如离心沉降、排阻层析、黏度以及带电性质等测定其分子量，得到蛋白质的相对分子量。目前，用于测定蛋白质的相对分子量的方法主要有两种：SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量和凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量。

生物样品的预处理是指将组织细胞或培养细胞破碎，使细胞内物质释放到缓冲液中，这是提取细胞内蛋白质的第一步。目前，用于生物样品的预处理的方法主要有 4 种：机械破碎法进行生物样品预处理、超声破碎法进行生物样品预处理、反复冻融法进行生物样品预处理和表面活性剂裂解及酶解法进行生物样品预处理。

特殊蛋白质的分离纯化是在要弃除非蛋白质物质成分后，利用不同蛋白质之间的差异性将目的蛋白提纯出来。充分了解目的蛋白的来源、理化特性以及纯化目的，有助于选择合理的分离纯化方法，达到事半功倍的效果。