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蛋白质的相对分子量测定实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

蛋白质的相对分子量即依据蛋白质的某些理化性质,如离心沉降、排阻层析、黏度以及带电性质等测定其分子量,得到蛋白质的相对分子量。目前,用于测定蛋白质的相对分子量的方法主要有两种:SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量和凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量。

 

原理

SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量的基本原理是蛋白质在电场中支持物上的迁移率差异主要依赖于样品中各种分子携带的电荷、分子大小与形状的差别,在聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中加入阴离子去垢剂 SOS,排除电荷、分子形状等因素(或使其作用减少到忽略不计的程度)。测定某种蛋白质的分子量,需要同时电泳分离一组标准品蛋白质,取其相对分子量的对数作为纵坐标,迁移率作为横坐标,作图得到标准工作曲线方程。将待测蛋白质的迁移率代入方程,即可计算得其相对分子量。
 
凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量的基本原理是按照蛋白质的分子大小和形状分离不同的蛋白质,因此可以以分子最标准品为参照,测定样品蛋白质的相对分子量。

 

来源:丁香实验团队

操作方法

SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量

SOS-PAGE 法测定蛋白质相对分子量,目前最常用的是垂直平板不连续电泳系统。平板电泳的优点是可以将标准品和不同样品放在同一块胶上进行电泳,使之具有更好的可比性。不连续电泳与连续电泳相比的优点是可以获得较集中的区带。 原理SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量的基本原理是蛋白质在电场中支持物上的迁移率差异主要依赖于样品中各种分子携带的电荷、分子大小与形状的差别,在聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中加入

凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量

凝胶过滤层析(gel filtration chromatography ) 又称分子筛层析(molecular sieve chromatography ) 或排阻层析(exclusion chromatography), 是按照分子的大小来分离蛋白质的方法。 原理凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量的基本原理是按照蛋白质的分子大小和形状分离不同的蛋白质,因此可以以分子最标准品为参照,测定样品蛋白

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