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简介
将目的基因转录调控原件构建到萤火虫荧光素酶报告基因质粒上,与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞,裂解细胞后分别加入荧光素酶底物,会发出生物荧光,从而被荧光测定仪读取。
计算萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶的相对比值,可以判断对目的基因转录调控原件的影响。
来源:
操作方法
(1) 质粒构建和转染:构建带有目的序列的萤火虫荧光素酶报告基因,与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞,24 h 后可收获样品。(2) 裂解:细胞用 PBS 润洗两次后,加入适量细胞裂解液(原液为 5X,用双蒸水稀释至 1X;参考体积:24 孔板每孔加入 100~150 μL,也可按下表适量加入裂解液),反复吹吸细胞,并于摇床震荡裂解 15 min,收集细胞至 1.5 mL EP 管中, 4 ℃
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