真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

细胞制备①在冰上预冷细胞培养物，然后用冰浴的盐溶液、PBS或其他的非变性缓冲液洗2〜3次。保存1份洗涤缓冲液（贮存在-70℃)以备将来进行样品校正，或用于酶、蛋白或RNA分析的对照材料。②选择下面合适的方法来处理悬浮液或单层培养物。处理悬浮培养物：悬浮培养的细胞所需的DDF体积取决于细胞的湿重或细胞数量。a.转移一小管悬浮培养物到已称重的塑料小管中，然后短暂地离心；b.倒出培养基，并称出细胞沉淀的

①每1倍体积的去垢剂提取物中加入3倍体积的RNA提取缓冲液，反复倾晃4次以使蛋白变性。②每一个样品中加入：0.1倍体积的2mol/L醋酸钠（PH4.0)1倍体积的水饱和苯酚0.2倍体积的氯仿每加入一种组分就剧烈混匀。把样品置于冰上，静置15min。③离心样品，10000g，20min。④用吸管小心地将上层的水相转移到另一干净的小管中。加人等体积的异丙醇，颠倒小管以混匀样品。把小管存放在-20℃过夜

① 加入0.1mol/L MgCl2，将一管毛地黄皂苷/EDTA提取物（主方案中的CYTO组分）的Mg2+含量调至7〜35mmol/L。37℃孵育样品20〜30min。所使用的毛地黄皂苷/EDTA提取物的体积取决于实验目的。镁的终浓度取决于最初材料的来源。通常，35mmol/L的镁是过多的，多用于以完全回收蛋白为目的的实验。②离心8min沉淀微管蛋白和微管结合蛋白。③转移上清液至一干净的小管中。用