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​附加方案:用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白

相关实验:真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

最新修订时间:

原理

胞质提取物中的微管蛋白和微管结合蛋白(MAP),可以通过37℃孵育,然后用镁沉淀的方法与其他的胞质成分分离<link />

材料与仪器

步骤

加入0.1mol/L MgCl2,将一管毛地黄皂苷/EDTA提取物(主方案中的CYTO组分)的Mg2+含量调至7〜35mmol/L。37℃孵育样品20〜30min。所使用的毛地黄皂苷/EDTA提取物的体积取决于实验目的。镁的终浓度取决于最初材料的来源。通常,35mmol/L的镁是过多的,多用于以完全回收蛋白为目的的实验。


②离心8min沉淀微管蛋白和微管结合蛋白。


③转移上清液至一干净的小管中。用咪唑缓冲液(pH7.5)或其他合适的缓冲液洗沉淀,并用细胞骨架溶解缓冲液重悬沉淀,然后测定蛋白浓度和进行电泳分析。

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注意事项

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常见问题

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来源:丁香实验

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