原理
胞质提取物中的微管蛋白和微管结合蛋白(MAP),可以通过37℃孵育,然后用镁沉淀的方法与其他的胞质成分分离
材料与仪器
步骤
① 加入0.1mol/L MgCl2,将一管毛地黄皂苷/EDTA提取物(主方案中的CYTO组分)的Mg2+含量调至7〜35mmol/L。37℃孵育样品20〜30min。所使用的毛地黄皂苷/EDTA提取物的体积取决于实验目的。镁的终浓度取决于最初材料的来源。通常,35mmol/L的镁是过多的,多用于以完全回收蛋白为目的的实验。
②离心8min沉淀微管蛋白和微管结合蛋白。
③转移上清液至一干净的小管中。用咪唑缓冲液(pH7.5)或其他合适的缓冲液洗沉淀,并用细胞骨架溶解缓冲液重悬沉淀,然后测定蛋白浓度和进行电泳分析。
来源:丁香实验