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蛋白质相互作用检测

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

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合作专家 | 唐婕妤硕士

临床医学 中南大学

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审核专家 | 黄玥琳博士

生理学 大连医科大学

简介

PLA 技术全称为 Proximity Ligation Assay,是看得见的蛋白互作新技术,即便是微量样本、微弱或者瞬时的互作以及低丰度的表达,也能在内源水平可视化目的蛋白的互作、定位和定量。并且该技术可将蛋白信号放大千倍,灵敏度高、特异性好。

不仅如此,该技术操作简单,用时短,仅需一天即可得到结果。

原理

PLA 技术是一种特殊的免疫分析方法,首先将不同种属的两个一抗分别与目的蛋白(目的蛋白是同一个蛋白的两个区域或者两个互相结合的蛋白,下面都以两个蛋白为例)孵育,然后加入耦联了寡聚脱氧核苷酸(单链 DNA)的二抗,即 PLA probe(探针),如果目的蛋白相互作用,两个探针之间的距离就会很近,产生邻近效应。

加入与探针互补的寡聚脱氧核苷酸(杂交溶液)和连接酶,寡聚脱氧核苷酸就会形成闭环。

加入聚合酶,就能以其中一条探针作为模板,滚环复制不断形成新的闭环,这些环化 DNA 都与探针有着互补片段,聚集在探针,也就是目的蛋白在细胞中原本的位置。

最后,加入荧光素标记的寡核苷酸(检测溶液)与环化的 DNA 作用,一个环化的 DNA 可以与上百上千个荧光素标记的寡核苷酸结合,形成蛋白质的原位检测或者相互作用检测。

应用

定位、定量、可视化检测蛋白质相互作用、检测目标蛋白。

来源:Alam MS. Proximity Ligation Assay (PLA)。 Curr Protoc Immunol. 2018 Nov;123(1):e58. doi: 10.1002/cpim

操作方法

🔥 PLA 技术检测细胞中蛋白质的相互作用

PLA 技术全称为 Proximity Ligation Assay,是看得见的蛋白互作新技术,即便是微量样本、微弱或者瞬时的互作以及低丰度的表达,也能在内源水平可视化目的蛋白的互作、定位和定量。并且该技术可将蛋白信号放大千倍,灵敏度高、特异性好。不仅如此,该技术操作简单,用时短,仅需一天即可得到结果。

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