细胞常用实验

细胞计数法：细胞计数法是测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。一般过程为接种21 孔/24 孔板细胞（如用培养瓶时则21 瓶）。分7 组，每组3 孔（或瓶），培养一周，期间逐日检测一组，计数。把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。

在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL-60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜处理后的HL-60细胞按粒系途径定向成熟分化，同时细胞的增殖力降低，几乎全部细胞丧失了软琼脂中形成集落的能力。

Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease) 是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase-1 主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。FAM-YVAD-FMK 试剂旨在通过测量活细胞中的 caspase 1 活化来检测细胞凋亡。

流式细胞术目前主要用于检测样本中所发出的荧光强度，分析细胞表面和细胞内分子表达水平，从多样性的细胞群中分辨及界定不同细胞种类，测定分离出的细胞亚群纯度，以及分析细胞的大小和总量。它可以同时分析单个细胞的多个参数。

5-溴-2'-脱氧尿嘧啶（5-bromo-2'-deoxyuridine， BrdU）是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入 S 期细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。近几年来，作为非放射性标记物，BrdU 可替代 H-TdR，避免了放射性污染问题，并同时具有敏感、简单和迅速的优点，因而用途十分广泛，对研究细胞动力学有重要意义，在肿瘤增殖细胞研究中有着特殊价值。

在肿瘤发生发展过程中，肿瘤组织常处于缺氧、低营养状态，在这种条件下，由于癌细胞分泌的血管生成因子的激活，会促进大量的新血管生成，为肿瘤生长提供所需的氧气和营养物质。

线粒体膜电位的下降时细胞凋亡早期的一个标志性事件，通过检测其变化观察细胞凋亡发生情况。

肿瘤干细胞 （CSC） 是指肿瘤内不仅具有自我更新能力还拥有较强侵袭迁移能力的那一小部分细胞，常常在化疗治疗后驱动肿瘤恶变和复发，与肿瘤的存活、增殖、转移和复发密切相关。传统上，肿瘤干细胞会从癌细胞系和肿瘤活检组织中分离出来，并在三维肿瘤球状体悬浮培养物中生长，成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法，目前肿瘤细胞的成球实验（成球大小及数目）是衡量肿瘤细胞干性的主要手段。判断单个细胞在适宜的条件

细胞辐照指的是用 X 射线，B、y 射线等电离射线来辐射细胞的过程。

慢病毒转染是一种常见的，在一种细胞系中稳定敲除/表达某种基因的方式。

细胞迁移是指细胞在外界信号的作用下从一个位置（区域）移动到另一个位置（区域）的过程，这个过程在生物体内发挥着非常重要的生理和病理学作用，比如损伤修复、肿瘤转移、免疫细胞的迁移、组织修复等。

克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一，贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

应用荧光探针 DCFHDA 检测细胞内总 ROS 水平，DCFHDA 探针本身不带荧光，可以自由穿过细胞膜，其进入细胞后，在细胞内酯酶的作用下被水解成 DCFH，DCFH 不能穿过细胞膜，因而滞留在细胞内，之后由 ROS 介导的氧化生成荧光物 DCF（激发波长 λex = 485 nm，发射波长 λem = 530 nm）。因此，可以通过检测 DCF 的荧光强度评估细胞内 ROS 的水平。

MTS 被细胞生物还原为可直接溶解于组织培养基中的有色的甲臜产物，活细胞里的脱氢酶类可将 MTS 转化为液态有色的甲臜化合物，这种化合物在 490 nm 的吸收值可以直接在 96 孔板中测量，这种反应是在活细胞中的脱氢酶产生的 NADPH 或 NADH 的作用下完成的。

体内细胞想要运动要先脱离其他细胞，从而使细胞粘附能力发生改变，细胞粘附实验主要用于判定细胞在经过各种药物处理、基因编辑或培养条件改变后，细胞的粘附能力改变情况。

EdU 中文名为 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷，是一种新型胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，可在 DNA 复制过程中替代胸苷掺入到新合成的 DNA 中。EdU 的乙炔基可与荧光或生物素标记的叠氮化物发生共价反应，形成稳定的三唑环，从而通过荧光检测到细胞增殖。

恶性肿瘤向邻近的组织侵犯称为侵袭。检测肿瘤侵袭能力是判断肿瘤转移能力的一种方法。

细胞周期的检测分析，是利用核酸染料可以与 DNA 分子特异性结合的特性，用流式细胞仪分析细胞周期各个阶段的 DNA 分布状态，从而计算出各个期的百分含量。

MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT 噻唑蓝为基础。MTT 为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下 tetrazolium 环开裂，生成蓝色的 formazan 结晶，formazan 结晶的生

体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比，它是测定细胞 周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。