细胞活力测定——Mts 法

MTS 被细胞生物还原为可直接溶解于组织培养基中的有色的甲臜产物，活细胞里的脱氢酶类可将 MTS 转化为液态有色的甲臜化合物，这种化合物在 490 nm 的吸收值可以直接在 96 孔板中测量，这种反应是在活细胞中的脱氢酶产生的 NADPH 或 NADH 的作用下完成的。

细胞活力测定、细胞增殖及细胞毒性的测定。

96 孔板、MTS 试剂盒、酶标仪

使用 MTS 试剂盒检测细胞活力的步骤如下：

1、取出 MTS 试剂于室温下静置 90 min 或 37 ℃ 水浴 10 min 溶解;

2、于培养有 100 μl 细胞（5 000-10 000 个）/孔的 96 孔培养板中加入 20 μl MTS 试剂，复孔 3-5 组，并设置对照组；

3、将 96 孔培养板放回培养箱，37 ℃、5% CO₂ 的环境下孵育 1～4 小时；若立刻检测可直接进行下一步，若之后检测，可在每孔加入 25 μl 10% SDS 终止反应，室温下避光保存于湿盒中，在 18 h 之内检测。

4、用酶标仪于 490 nm 处测定 OD 值。

5、结果分析：将各测试孔的 OD 值减去对照孔或调零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均数

1、试剂加入后轻轻振摇培养板，使 MTS 试剂与培养基充分混匀；

2、如果要测定细胞的具体数量，需要先做一个标准曲线；

3、MTS 在避光 0～5 ℃ 的条件下存放一年，测定效果完全不变。在 -20℃ 的条件下可以贮存更久。反复冻融会增加背景值，经常使用时请于 0～5 ℃ 条件下保存。

4、试剂加入后培养时间根据细胞种类的不同和每孔细胞数量的多少而异。对于贴壁细胞，加入 MTS 的培养时间一般为 1～4 h，但在培养 30 min 左右即可取出肉眼观察显色程度（根据细胞种类而定）。与贴壁细胞相比，悬浮细胞较难显色。对于悬浮细胞，在加入 MTS 培养 1～4 h 后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定决定。

1、OD 值过高

答：可酌减铺板细胞数或 MTS 试剂用量。

2、MTS 的背景高

答：试剂长时间暴露在直接光照下面，注意将试剂避光保存，反应时也应避光反应。