原理
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
材料与仪器
细胞悬液
台盼兰 四甲基偶氮唑盐 酸化异丙醇
普通显微镜 血球计数板 试管 吸管 酶标仪 分光光度计
台盼兰 四甲基偶氮唑盐 酸化异丙醇
普通显微镜 血球计数板 试管 吸管 酶标仪 分光光度计
步骤
一、细胞计数
1. 将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。
3. 静置3分钟。
4. 镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4×10 000
注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
二、细胞活力
1. 将细胞悬液以0.5 ml加入试管中。
2. 加入0.5 ml 0.4%台盼兰染液，染色2-3分钟。
3. 吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。
4. 镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。
死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
三、MTT法测细胞相对数和相对活力
活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。
1. 细胞悬液以1 000 rpm离心10分钟，弃上清液。
2. 沉淀加入0.5-1 ml MTT，吹打成悬液。
3. 37℃下保温2小时。
4. 加入4-5 ml酸化异丙醇（定容）。打匀。
5. 1 000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计570 nm比色，酸化异丙醇调零点。
注意：MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
注意事项
1.镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
2.死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
3.活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
4.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
常见问题
1、0.4%台盼兰染液配制：
台盼兰 0.4克 加双蒸水至100 ml.
2、MTT配制：
MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中，4℃下保存。
3、酸化异丙醇配制：
异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。
来源：丁香实验
