细胞周期的检测分析
别名：cell cycle，细胞周期 ，细胞周期实验，细胞周期检测
最新修订时间：
简介
细胞周期的检测分析，是利用核酸染料可以与 DNA 分子特异性结合的特性，用流式细胞仪分析细胞周期各个阶段的 DNA 分布状态，从而计算出各个期的百分含量。
原理
细胞周期的检测分析的基本过程可分为如下几步：
1. 收集待检测细胞，用 2 ml PBS 重悬，1000 r/min 离心 5 min，弃上清。细胞数要求每组 1 X 106 个细胞。
2. 加入 1 ml PBS 和 2 ml 无水乙醇，重悬，用封口膜封口。4 °C 下可保存 1 h 至 15 d。
3. 将待检测样品 1000 r/min 离心 5 min，弃固定液，再用 2 ml PBS，1000 r/min 离心 5 min，洗涤 2 次。弃上清，用 400 μl PBS 重悬细胞。
4. 加入 50 μl 的 PI 和 50 μl 的 RNase，室温避光孵育 30 min。
5. 上流式细胞仪检测。
材料与仪器
器材：
流式细胞仪、离心机
试剂：
① PI 400 μg/ml，PI 溶于水，4 ℃ 避光保存；
② RNase 试剂。配制成 1 mg/ml，RNase 溶于 PBS，分装，-20 ℃ 保存。
③ 无水乙醇、PBS
耗材：
流式专用样品管、玻璃管、离心管、封口膜
步骤
细胞周期的检测分析的基本过程可分为如下几步：
1. 收集待检测细胞，用 2 ml PBS 重悬，1000 r/min 离心 5 min，弃上清。细胞数要求每组 1 X 106 个细胞。
2. 加入 1 ml PBS 和 2 ml 无水乙醇，重悬，用封口膜封口。4 °C 下可保存 1 h 至 15 d。
3. 将待检测样品 1000 r/min 离心 5 min，弃固定液，再用 2 ml PBS，1000 r/min 离心 5 min，洗涤 2 次。弃上清，用 400 μl PBS 重悬细胞。
4. 加入 50 μl 的 PI 和 50 μl 的 RNase，室温避光孵育 30 min。
5. 上流式细胞仪检测。
注意事项
1. 样品制备过程要轻柔，固定液浓度不宜过高，以防细胞聚集成团。
2. 仪器要用荧光微球校准，把 CV 值调节到最佳，CV 值越小，DNA 分析的数据结果就更准确。
3. 样品检测中样品的流速不要太大，一般控制在每秒 100 个细胞。
来源：丁香实验
