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细胞常用实验

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问细胞实验中D-半乳糖用什么溶解可以配置高浓度的母液？就是可以直接在细胞培养的过程中进行干预

whilt-shirt

可以先用DMSO配制高浓度母液，然后用培养基稀释到所用浓度

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问最近在静电纺丝的纤维膜上培养细胞染色后看不到，细胞漏在了比较薄的纤维膜下面，但是比较厚的纤维膜下面和膜上都没有看到，为啥啊

天一湖医者

先把膜润湿，去掉培养基，再用高密度细胞悬液种植，待吸附0.5~2h，待吸附后沿孔边缘。

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问各位大神！做免疫荧光细胞染色的时候，最终拍照的时候，我们除了保证曝光时间还有光照亮度统一以外，还要统一什么？

balalaLy

看你使用的显微镜有哪些参数是可以调的，反正都要一致。先大概看一下哪组的荧光比较明显，以亮度低的未基准设置一组曝光参数，以亮度高的一组设置一组曝光参数。就是拍两组不同曝光参数的图。

2 回答1778 围观

问AM/PI活死细胞染色红绿荧光重叠问题

哼哼哈哈Yolk

请问你解决了吗，我也遇到了同样的问题，红绿荧光重叠在同一个细胞内

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问每次做的MTT结果都有点不太一样，但趋势是一样的，除了考虑铺细胞的问题，还可以是什么呢？

三昧骨科

铺细胞前的计数要准确。同时不知道你用的什么细胞，如果是细胞株的话和代就没有关系了。然后你每次用同样试剂的话，加试剂的枪是否准确啊，再就是和个人手法有关系。建议把数据拿给老师看一下，一般都需要重复多做几次的，排除一些不好的实验结果。如果趋势一样，但是最后值差的很多，建议同样条件下重复多做几次，毕竟实验就是需要反复重复的

4 回答545 围观

问请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀？

dxy_gwrp7ndq

细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测，采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体，或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体，另一个抗体标记酶，作为检测抗体。

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问加药处理细胞，收集细胞提总蛋白跑WB，漂着的细胞要不要收集？收和不收对结果影响大吗？

米米米小喵

死细胞离心去掉，处理细胞时摸好条件，尽量不要让细胞死的太厉害，细胞增殖受到抑制的组可以少加点裂解液，方便调齐。

4 回答3516 围观

问Trizol提取淋巴细胞总RNA我在提RNA时，可以从-80℃里面拿出来再多加点Trizol 把不溶的沉淀再溶吗?

年华可可

收集好细胞以后，1mL PBS洗一次，然后去掉PBS的时候用移液枪吸出上清900uL以上，之后再把细胞沉淀吹起（留少量液体比较容易吹散细胞，而不是大量液体去吹打），然后再加Trizol，vortex剧烈震荡一分钟，500万个细胞不算多，应该没有问题的

1 回答2610 围观

问分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了，有什么方法可以保护细胞的活性吗？

dxy_29k93ve4

分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养，别让他饿着

11 回答420 围观

问细胞水平要做WB，多少细胞提的蛋白够做WB？跟细胞类型有关吗？

whilt-shirt

基本上10^6细胞就够了，可以再多一点

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问细胞增殖检测（MTT法）细胞数问题？

天一湖医者

移液时的误差，或者部分边缘蒸发。

3 回答506 围观

问关于 PHA 刺激 PBMC 增殖，用 CCK-8 检测，实验孔 OD 值却不稳定是为什么？

roby_0_0_2000

你的PHA-p 5ug/ml就可以了，浓度大了自然会死。死于过度刺激。还要加IL-2，不加会死的。

3 回答3747 围观

问MTT与CCK-8比较？

未来9

CCK-8法的优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、CCK-8法能快速检测；3、CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；4、CCK-8法的重复性优于MTT法；5、CCK-8法对细胞毒性小；6、CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。CCK-8法的缺点:1、与MTT法相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。2、CCK-8试剂的颜色为淡

3 回答1897 围观

问做MTT实验时，铺板时间太长，会对细胞有影响吗？多久时间会对细胞有影响？

cxsm

这很难说，要尽量保证细胞的生长空间和营养物质的提供

5 回答632 围观

问细胞冻存液污染了，细胞怎么办

Doctor高1

如果冻存液污染，那你冻存的细胞肯定也被污染了，只能丢弃，因为污染的细胞你花时间金钱去补救，结果都差强人意

5 回答691 围观

问细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响

好假哟00

不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子，因为商品化冻存液中应该也有 DMSO，对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。

2 回答405 围观

问细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？

丁香实验

DMSO不能超过10%，因为有细胞毒性，一般都采用10%，血清一般用30%到40%，当然再多一点血清也没有坏作用，只是浪费而已。一般来说，DMSO：血清：培养基的体积比为1：3：6或1：4：5。冻存液最好现配现用，不易放的时间过久（一般不超过一个月）。但刚配好的冻存液会产热，需放置一会才能用于悬浮细胞。冻存细胞（以50ml培养瓶）时，先将冻存液按DMSO：血清：培养基的体积比按1：4：5配好，再处

1 回答2771 围观

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